[发明专利]一种基于水凝胶包裹单细胞的方法及产品和在制备通用型红细胞中的应用

权利要求书

1.一种基于水凝胶包裹单细胞的方法，其特征在于，包括：

(1)1g油酸和1.27g TSTU溶入无水DMF，加入0.1ml三乙胺，氮气保护下，35℃条件下，反应8h；停止反应，减压蒸出DMF，加乙醚洗涤，得到油酸-琥珀酰亚胺酯；

将含有189.75mg油酸-琥珀酰亚胺酯的DMF溶液通过恒压滴液漏斗缓慢滴入含1g聚氧乙烯二胺的DMF溶液中，其中，聚氧乙烯二胺MW＝2000，溶液中还含有0.1ml三乙胺，滴加完毕，反应2h，停止反应，减压蒸出DMF，加乙醚洗涤，得到(E)-N-(2-(2-氨基乙氧基)乙基-9-硬酯酰胺)；

将0.9g(E)-N-(2-(2-氨基乙氧基)乙基-9-硬酯酰胺)和43.7mg丁二酸酐溶于DMF，加入5ml吡啶，氮气保护，油浴50℃，反应4h减压蒸出DMF，加乙醚洗涤，得到(E)-(4-(2-(2-(9-硬酯酰胺)乙氧基)乙基)氨基)-氧代丁酸；

将0.8g(E)-(4-(2-(2-(9-硬酯酰胺)乙氧基)乙基)氨基)-氧代丁酸和121.8mg TSTU溶于无水DMF，加入0.1ml三乙胺，氮气保护，油浴35℃，反应4h，停止反应，减压蒸出DMF，加乙醚洗涤，得到油酰胺聚氧乙烯-4-丁酰胺-4-N-羟基琥珀酰亚胺酯，

(2)取浓度为2mg/mL油酰胺聚氧乙烯-4-丁酰胺-4-N-羟基琥珀酰亚胺酯和浓度为3mg/mL辣根过氧化物酶HRP，室温下搅拌反应1h，再用超滤管离心，弃掉未反应的分子，得到BAM-HRP，

(3)将收集的人全血离心，弃去上清液，用PBS缓冲液洗涤两次，得到红细胞体系；向红细胞体系中加入BAM-HRP，使体系中BAM-HRP的浓度为3mg/mL，摇匀，室温静置10min进行反应，反应完成后，离心收集沉淀，用PBS缓冲液洗涤一次，得到表面锚定有BAM-HRP的细胞体系，

(4)活化PSA：取0.125g聚唾液酸PSA，加入含10ml水的烧杯中，放在磁力搅拌器上，300～400rpm下搅拌；再取0.3g EDC和0.2g NHS，倒入烧杯，活化1h；再加入0.45g的盐酸酪胺，反应4h，反应结束前，提前半小时准备透析袋，将剪好的透析袋放入另一烧杯中，倒入无水乙醇；在85℃下水浴加热活化；取出透析袋用夹子封好一端，将溶解的PSA用枪转移至透析袋内，并用夹子封闭，放入装有水的烧杯内，将烧杯放在磁力搅拌器上，透析2天，去除未反应的小分子，冻干48小时，得到盐酸酪胺-聚唾液酸，

(5)向表面锚定有BAM-HRP的细胞体系中加入盐酸酪胺-聚唾液酸和双氧水，体系中盐酸酪胺-聚唾液酸的浓度为10mg/mL，双氧水的浓度为1mmol/L，摇匀静置30min，经酰胺化反应后，离心收集沉淀，用PBS缓冲液洗涤两次，得到表面被水凝胶包裹的红细胞。

2.一种如权利要求1所述方法制备的表面包裹有水凝胶的红细胞。

3.如权利要求2所述的表面包裹有水凝胶的红细胞在制备通用型红细胞中的应用。