[发明专利]鸭源性冠状病毒弱毒株IBVDCV35及其应用

说明书

本发明涉及微生物领域，具体提供了一株鸭源性冠状病毒弱毒株IBV DCV35(保藏编号为CGMCC NO.13852)及其应用。所述鸭源性冠状病毒弱毒株IBV DCV35是由鸭源冠状病毒强毒株IBV ZZ2004(保藏编号为CGMCC NO.3842)传代致弱筛选得到，所述弱毒株IBV DCV35的S1基因序列发生明显变异，且变异后的序列能在第22～35代稳定遗传。本发明筛选的弱毒株IBV DCV35通过人工感染试验和水平传播试验进行SPF鸡感染，均未见毒力返强现象。实验表明，本发明的致弱毒株接种于鸡后，可有效激活鸡体内的免疫系统并对鸡传染性支气管炎有良好的预防作用，能用来作为预防鸡传染性支气管炎的疫苗毒。

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体地说，涉及一种鸭源性冠状病毒弱毒株。

背景技术

鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)严重危害我国的养殖业，每年因鸡传染性支气管炎所导致的经济损失非常严重，而预防本病主要用的是弱毒疫苗，其中使用最为广泛的弱毒疫苗为H120和H52。但是由于IBV血清型众多，IBV基因组又容易变异，新的IB变异株不断出现，使得现有的疫苗对新出现的变异流行毒株不能产生有效的保护作用，导致IBV的防治变得困难。

IBV ZZ2004是从引起免疫抑制和生长抑制为主要症状的番鸭中分离到的一种病毒，该病毒能引起肉仔鸡发生类似的症状，发病率为80％，死亡率为10％以上，发病鸡群体重减轻37％左右，免疫力下降，经济损失达30％以上。鸭源性IBVZZ2004在致病性上与国内所报道的IBV存在明显的不同，引起显著的免疫抑制和生长抑制，且对鸡和鸭均能感染。IBVZZ2004毒株与国内流行的IBV亲缘性很低，与国内的主要疫苗株的亲缘性也很低，如M41株、H120、Beaudette、IBV4/91的同源性为85.2％～87.9％。该病毒分离株ZZ2004的分离和鉴定方法、致病性以及基因变异等相关特性都已经在发明专利ZL201010225577.4中有所展示，在生产实践中现有的疫苗对鸭源性IBVZZ2004不能产生有效的保护力，使得该病不断流行。从已获得研究资料看，鸭源性IBVZZ2004毒株的免疫原性良好，具备作为疫苗毒的基本要素。因此，有必要对其进行致弱研究，以期制备一株良好的弱毒株，为IBVZZ2004弱毒疫苗研发奠定基础。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种鸭源性冠状病毒弱毒株，并对其基因特征以及在传染性支气管炎预防方面的应用进行研究。

本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供一种鸭源性冠状病毒弱毒株IBV DCV35，经鉴定为鸭源性冠状病毒弱毒株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)，保藏日期为2017年05月27日，保藏编号为CGMCC No.13852。

所述鸭源性冠状病毒弱毒株IBV DCV35由鸭源冠状病毒强毒株IBV ZZ2004(保藏编号为CGMCC NO.3842，保藏日期为2010年04月29日)作为种子病毒，进行传代致弱而获得，具体过程为：

种子病毒接种鸡胚前先经56℃水浴20min，接种SPF鸡胚后，进行31～33℃低温培养，再用前述方法做同样处理，连续传至第25代，从第26代开始采用37℃培养，再连续传代至第35代，获得致弱毒株IBV DCV35。