[发明专利]用于诊断活动性结核类疾病的分子标志物及其应用

说明书

本发明公开了用于诊断活动性结核类疾病的分子标志物及其应用。本发明证实了miR‑16、B12、CD272可作为诊断活动性结核类疾病的分子标志物，并且三者组合诊断能够提高结核病的诊断准确率(＞90％)，远远优于单一标志物诊断，适用于活动性结核类疾病筛查、诊断和药效评价。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，更具体地，涉及用于诊断活动性肺结核的分子标志物及其应用。

背景技术

据估计，全球有1/3的人口感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)，约5％～10％感染人群最终会发展为结核病(Tuberculosis，TB)，我国是全球22个TB高负担国家之一。2014年WHO全球TB控制报告，全球每年新发TB患者约900万，其中死亡约150万，而我国每年新发TB患者超过100万，结核病疫情呈现出高感染率、高患病率、高耐药率、区域患病率差异大、乡村疫情高于城镇、中老年患病多、无症状肺结核患者比例大等特点。目前，临床针对活动性结核病诊疗的困点与难点仍旧是诊断与筛查，诊断发现时往往已经错过了最佳的防治时机。为此，寻找新的活动性结核病标志物、开发新型的诊断方法，尤其是早诊断已成为当下控制活动性肺结核类疾病的重点发展方向。

传统的肺结核筛选诊断方法，主要依据胸部影像学表现和痰结核菌检查，结合临床表现及其它相关检查综合分析后做出判断，主要的诊断方法主要包括放射学、病原学和免疫学诊断等几个方面。这些方法在结核的实验诊断中发挥了重要作用并取得了有目共睹的成就，但也存在一些不足，例如检出率低、检测时间长、诊断效率不高或者需配套特殊昂贵的仪器设备等。

针对这些问题，近年来各种肺结核诊断标记物及方法被不断的提出。例如，各种结合分枝杆菌分泌的特异性蛋白标志物，如CD1c、Rv1984c、IP10、Eotaxin等；针对免疫性系统相关的特异性细胞因子I-309、MIG、IL-8、白介素等血浆检测；针对血清或全血样本肺结核分枝杆菌的特异性核酸标志物检测，包括lncRNA-MIR3945HG、mRNA、micRNA；针对结核分枝杆菌分泌到尿液甘露糖修饰的脂阿拉伯甘露聚糖，开发的尿液检测等。近来，为了进一步提高结合分枝杆菌的检测灵敏度与检测率，各种组合式的检测方法也逐渐被报道。例如，冯晓燕等人发明了一种包括Rv3871，Rv3876和Rv3879三种抗原的活动性肺结核诊断方法，对痰涂片阳性/痰培养阳性、痰涂片阴性/痰培养阳性以及痰涂片阴性/痰培养阴性结核患者均具有高灵敏度与特异性；通过采用活动性肺结核病的特异血清miRNAs组合(hsa-miR-29c、hsa-miR-22、hsa-miR-320b和hsa-miR-101)，在血清miRNAs水平上对活动性肺结核病检测，灵敏度为90.2％。目前，在活动性肺结核诊断方法大部分新型诊断方法都是单一层面检测，如利用特异性蛋白标志物诊断或者核酸标志物诊断。考虑到个体的差异性、TB发病机制的复杂性，单一层面的诊断筛选对检测特异性不具备大规模筛选的优势。