[发明专利]一株大肠杆菌O157:H7弱毒株及其应用

说明书

本发明提供了一株大肠杆菌O157:H7弱毒株及其在应用，属于生物技术领域。该大肠杆菌O157:H7的弱毒株JSC2株的保藏号为CCTCC M 2017356。通过制备该弱毒株菌液，对BALB/c小鼠和乳兔进行攻毒试验发现，该菌株不引起小鼠和乳兔的死亡，不导致明显的组织病理变化。且该弱毒株皮下接种小鼠1次后，可诱导高水平IgG抗体，抗体持续期长，能够提供受免动物良好的免疫效力，可用于大肠杆菌O157:H7疫苗和诊断试剂的研制。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及到一株大肠杆菌O157:H7弱毒株及其应用。

背景技术

大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）O157:H7，是一种常见的又称为肠出血性大肠杆菌，是重要的食源性人兽共患病原。近20余年来，由大肠杆菌O157:H7引发的食物中毒在世界各地以不同规模暴发流行，它的动物宿主范围非常广泛，其中反刍动物带菌率较高。相对来讲，动物作为传染源要比人类更为危险，它往往是动物源食品污染的根源。大肠杆菌O157:H7的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性以及抗生素治疗会加剧病情等特点，已经成为全球性的公共卫生问题。目前对其感染缺乏理想的防治策略。

大肠杆菌O157:H7对不同动物的致病性有着明显不同。反刍动物是主要带菌者，但一般不引起明显临床症状，幼畜偶尔会出现腹泻症状。小鼠和乳兔是代表型实验动物，用来评估菌株致病力和免疫效力。3日龄乳兔，口服1×10¹⁰ CFU，3天可以导致腹泻，第7天腹泻加重，部分死亡。4-6周龄小鼠，口服1×10¹⁰ CFU，可以导致50-60%小鼠轻微腹泻并死亡，腹腔注射，可以导致85%以上小鼠死亡。

虽然市场上有商品化疫苗上市，但制备方法复杂，成本较高。例如加拿大Bioniche公司研制的Econiche，主要抗原成分为大肠杆菌 O157:H7提取物—Ⅲ型分泌蛋白（TTSP），目前在加拿大和美国部分区域上市销售，需在肉牛宰杀前至少3个月免疫，一定程度上降低大肠杆菌O157:H7在牛群中的传播，但抗原制备方法复杂、成本高，研制更加低廉而高效的疫苗，是研究的热点，也是全世界学者关注的领域。

发明内容

本发明的目的是提供一株大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7弱毒株，保藏号为CCTCC M 2017356，该菌株对BALB/c小鼠和乳兔无明显致病力，具有较好的免疫原性。

本发明的另一目的在于提供一种制备所述大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7弱毒株菌液的方法，该制备方法简单、安全、成本低。

本发明的再一目的在于提供所述大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7弱毒株在制备大肠杆菌O157:H7疫苗中的应用，该疫苗制备方法简单，成本低廉，保护效果好。

本发明的目的采用下述技术方案实现。

一株大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7弱毒株，是大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7 JSC2株，保藏号为CCTCC M 2017356。

本发明通过大肠杆菌显色平板筛选、聚合酶链式反应扩增、血清凝集试验，筛选得到大肠杆菌O157:H7 JSC2株。

通过BALB/c小鼠和乳兔口服实验，表明JSC2株不引起小鼠和乳兔的死亡，不导致明显的组织病理变化，而以标准菌株大肠杆菌O157:H7 EDL933株为对照，等量接种实验动物后，能引发动物发病、死亡，说明本发明筛选到的大肠杆菌为O157:H7 JSC2株为弱毒株。