[发明专利]一种用于p53蛋白的荧光检测剂及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于p53蛋白的荧光检测剂，包括磁性纳米粒子、双链DNA、以及包覆在磁性纳米粒子表面用于与双链DNA连接的功能层；所述的双链DNA由DNA‑1单链和DNA‑2单链杂交得到；所述的DNA‑1为羧基寡核苷酸探针，序列为：COOH‑(CH₂)₆‑TTT TTT TCC GGG CAT GCC CGG CAT TGC‑3′；所述的DNA‑2为DNA‑1的部分互补序列，序列为：5′‑GGG CAT GCC C‑3′。本发明还公开了所述的荧光检测剂的制备方法和在检测野生型p53蛋白中的应用。该制剂的制备成本低，使用该制剂能够敏感、快速、精确的捕获p53蛋白，实现p53蛋白的超灵敏、高选择性、高准确度的检测，而且检测限低，能够定量分析检测正常细胞和癌细胞裂解液中的p53蛋白，可用于临床癌症诊断和癌症早期发现。

技术领域

本发明属于p53蛋白检测技术领域；具体涉及一种野生型p53蛋白的荧光检测剂。

背景技术

癌症的发病率逐年上升，已成为威胁人类健康的主要疾病之一。据估计，如果癌症可以在早期发现和治疗，那么癌症死亡率的会降低大约30％。因此，癌症生物标志物的早期检测已成为癌症筛查和预后研究的热点。p53蛋白作为肿瘤抑制因子和转录因子蛋白，在细胞周期、凋亡和DNA修复中起着重要的调控作用。p53蛋白分为野生型和突变型两种。在所有的癌症中，p53基因的突变增加到大约50％，并且在各种各样的人类癌症中，这种基因突变导致突变型p53蛋白的积累和野生型p53蛋白的减少。因此，p53蛋白的有效检测一直是临床研究和癌症早期诊断的重点。这种特异的相互作用已作为一种抗体替代品来检测p53蛋白。

现有的检测方法主要用来检测野生型的p53蛋白。

目前，有许多于能敏感检测p53蛋白的方法。各种技术，包括表面增强拉曼散射(SERS)，化学发光，电化学方法和葡萄糖计等已被用于p53蛋白的检测。例如公开号为CN104977277A的中国专利文献公开了一种可同时检测细胞内野生型和变异p53蛋白的纳米囊泡，所述囊泡内部包裹有能特异性识别野生型p53蛋白的纳米金，同时囊泡表面修饰有异硫氰酸荧光素标记的抗变异p53蛋白抗体。再如，公开号为CN103276087A的中国专利文献公开了高灵敏度的蛋白检测方法，例如，方式一、直接包被法进行管壁固相PLA：蛋白质或抗体直接吸附到实时荧光定量PCR管壁，进行PLA检测；方式二、交联剂固定法进行管壁固相PLA：蛋白质或抗体通过戊二醛交联到实时荧光定量PCR管壁，进行PLA检测。

然而，目前大多数被报道的检测p53蛋白的方法是基于抗体与抗原特异性结合作用的免疫检测。抗体的昂贵成本和抗体修饰的复杂功能化步骤限制了其临床应用。

发明内容

为解决现有检测膜蛋白方法的步骤繁琐及造价高的问题，本发明提供了一种DNA功能化修饰的用于p53蛋白的荧光检测剂，旨在提高荧光检测p53蛋白的灵敏度，降低实验成本，简化实验步骤。

本发明第二目的在于，提供了一种所述的荧光检测剂的制备方法。

本发明的第三目的在于，提供了所述的荧光检测剂的应用。

一种用于p53蛋白的荧光检测剂，包括磁性纳米粒子、双链DNA、以及包覆在磁性纳米粒子表面用于与双链DNA连接的功能层；所述的双链DNA由DNA-1单链和DNA-2单链杂交得到；

所述的DNA-1为羧基寡核苷酸探针，序列为：COOH-(CH₂)₆-TTT TTT TCC GGG CATGCC CGG CAT TGC-3′；

所述的DNA-2为DNA-1的部分互补序列，序列为：5′-GGG CAT GCC C-3′。