[发明专利]一种检测人及动物血清抗SFTS抗体的胶体金免疫层析试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体是涉及一种检测人及动物血清抗SFTS抗体的胶体金免疫层析试纸条。

背景技术

新布尼亚病毒(Novel Bunyavirus，SFTS Bunyavirus)，是发热伴血小板减少综合症(Fever with Throbocytopenia Associated syndrome，SFTS)的病原，为布尼亚病毒科白蛉热病毒属的一种新型病毒，于2009年在中国首先发现，也是中国首例发现的新型病毒。是威胁我国人民健康和公共卫生安全的重要新发传染病，其临床表现以发热伴血小板、白细胞减少和消化道症状为主要特征，重症死亡率高达15～30％，严重影响着人民的健康和生命安全。到目前为止，全国已有河南、江苏、湖北、山东、安徽和辽宁等26个省发现病例，每年有数千病例,造成数百人死亡。中国国家疾控中心、河南省疾控中心、江苏省疾控中心等单位先后成功的分离到该病病毒，并对其进行了病原学、流行病学、临床医学等研究。目前该病毒序列已经阐明，但是对SFTS尚无特效药治疗和疫苗预防。

SFTS很容易与血液、消化、呼吸等多系统疾病相混淆，加上临床医生对其缺乏认知，给该病的诊断和鉴别诊断带来困难。该病毒需要通过实验室手段进行确诊，常用的方法有病毒分离培养、病毒核酸检测和免疫学检测等。病毒分离和免疫学检测或是操作复杂、费时，不能快速得到检测结果，或是检测敏感度不够。

当前，基于PCR技术(常规PCR或荧光定量PCR)对病毒核酸进行检测是对SFTS进行早期快速诊断的重要手段。PCR技术具有检测敏感性高，操作简单、快速等优点，然而其前期投入费用较大(对实验室功能分区以及PCR仪的依赖)，而且易受实验室污染而导致假阳性，加上SFTS为人兽共患自然疫源性疾病，多发生于山区和丘陵等医疗卫生条件相对较差的地区，所以，亟待建立一种快速、可靠的，适合基层单位和现场应用的SFTS病毒检测技术。

发明内容

本发明解决的技术问题是现有的新布尼亚病毒检测技术不符合快速、简便、高灵敏度的要求，进而提供一种检测人及动物血清抗SFTS抗体的胶体金免疫层析试纸条。

本发明的技术方案是：一种检测人及动物血清抗SFTS抗体的胶体金免疫层析试纸条，所述试纸条含有：胶体金标记的特异性SFTS重组抗原的玻璃纤维膜、包被有特异性SFTS重组抗原的检测线和包被有鼠抗-特异性SFTS重组抗原单克隆抗体的质控线的硝酸纤维素膜；待测样本中的抗SFTS抗体先与胶体金标记特异性SFTS重组抗原反应，然后与硝酸纤维素膜上对应的特异性SFTS重组抗原反应，形成特异性SFTS重组抗原-特异性SFTS抗体-胶体金标记特异性SFTS重组抗原夹心复合物，通过胶体金颗粒特有的颜色示踪而判断特异性抗体的有无。

进一步地，所述特异性SFTS重组抗原的制备方法为：

(1)分离得到SFTS病毒的病毒株，用RNA提取试剂提取出SFTS病毒的RNA；

(2)以SFTS病毒株的基因组为模板，通过PCR扩增得到N蛋白基因产物；

(3)用内切酶Sph I和Hind Ⅲ酶切处理在目的基因两侧带有限制性内切酶Sph I和Hind Ⅲ识别位点的所述SFTS病毒株N蛋白基因PCR产物，与经相同酶切处理的表达载体pQE 30连接，构建重组表达质粒，转化大肠杆菌的感受态细胞，得到阳性克隆重组质粒；用终浓度0.3mmol/L的IPTG进行诱导表达，表达产物经纯化后即获得特异性SFTS重组抗原。

进一步地，所述的RNA提取试剂的组成成分为：质量浓度为0.6-0.8％的溴化钠、质量浓度为0.2-0.5％的硫氰酸胍、质量浓度为0.1-0.2％的四氯化碳、质量浓度为1.2-1.4％的乙酸乙酯、质量浓度为0.2-0.5％的2-乙氧基乙醇、质量浓度为0.05-0.15％的Triton X-100，余量为DEPC-H₂O。

进一步地，所述的一种检测人及动物血清抗SFTS抗体的胶体金免疫层析试纸条的制备方法包括下述步骤：

S1、制备胶体金标记的特异性SFTS重组抗原的玻璃纤维膜：

(1)胶体金溶液的制备：

用王水浸泡容器一定时间，然后用超纯水清洗干净，烘干；取1％氯金酸1mL加入到去离子双蒸水中至终体积为100mL，得到的氯金酸浓度为0.01％，将得到的氯金酸加热至沸腾，磁力加热搅拌下加入1％柠檬酸三钠水溶液2.0mL，继续加热直至溶液呈葡萄酒色为止，冷却后置于棕色瓶中4℃冰箱保存备用；

(2)金标特异性SFTS重组抗原的制备：