[发明专利]一种通用型猪大肠杆菌病疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供一种通用型猪大肠杆菌病疫苗及其制备方法，属于动物细菌基因工程技术领域。所述疫苗，含有如下抗原：由周质伴侣蛋白Skp、MltA‑相关蛋白MipA和长链脂肪酸外膜转运蛋白Lomt形成的融合蛋白、不耐热肠毒素的B亚基和志贺毒素2e的B亚基，所述抗原的序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。本发明通用型猪大肠杆菌病疫苗免疫后，可以使动物产生较高的IgG和IgA抗体水平，抗体持续期超过120天。本发明疫苗免疫后，能够同时保护ETEC F4、F5、F6、F41和O139的攻击，保护率均为100%，且无腹泻现象发生，与现有疫苗相比，保护范围显著扩大。

技术领域

本发明属于动物细菌基因工程技术领域，具体涉及一种通用型猪大肠杆菌病疫苗及其制备方法。

背景技术

产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia Coli，ETEC)系人和幼畜(初生仔猪、犊牛、羔羊及断奶仔猪)腹泻中最常见的病原性大肠杆菌，其致病力主要由菌毛和肠毒素两种毒力因子构成，二者密切相关且缺一不可。初生幼畜被ETEC感染后因剧烈水样腹泻和迅速脱水死亡，发病率、死亡率高。据统计，国内幼畜ETEC性腹泻病在幼畜腹泻病中所占比例为：猪35％，牛26％，羊17％，尤其是一周以内的新生幼畜。

ETEC血清型众多，导致新生仔猪黄痢、白痢主要致病菌毛型包括k88(F4)、k99(F5)、987P(F6)和F41等。ETEC除具有粘附功能的菌毛外，不耐热肠毒素(heat-labileenterotoxin，LT)和耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin，ST)也具有很强的致病力，在ETEC不同血清型中LT的携带率高于ST。LT由一个A亚基和五个B亚基组装成AB₅型的外毒素，其中LTB负责与宿主肠上皮细胞的神经节苷脂(GM1)受体结合，进而发挥致病作用。

导致仔猪水肿病的ETEC主要包括O138、O139、O141等血清型，危害断奶后1-2周的仔猪，尤其是发育良好的仔猪群，导致腹泻、皮下组织水肿和神经系统病，造成很大的经济损失。志贺毒素2e(Shiga toxin 2e,Stx2e)，又称为水肿毒素，是仔猪水肿病的直接致病因子。Stx2e也是AB₅型的外毒素，Stx2eB同样负责与宿主细胞的糖苷脂(Gb4)发生结合，发挥受体的功能。

目前缺少能够防控多种血清型的通用型猪大肠杆菌病疫苗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够同时防控5种血清型ETEC的通用型猪大肠杆菌病疫苗，显著提高了免疫接种效率、降低生产成本。

本发明的再一目的是提供上述通用型猪大肠杆菌病疫苗的制备方法，该方法操作简单，成本低，安全性高。

一种通用型猪大肠杆菌病疫苗，该疫苗含有如下抗原：由周质伴侣蛋白Skp、MltA-相关蛋白MipA和长链脂肪酸外膜转运蛋白Lomt形成的融合蛋白、不耐热肠毒素的B亚基和志贺毒素2e的B亚基，所述抗原的序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。

在本发明中，所述融合蛋白的浓度为90μg/mL-1mg/mL，不耐热肠毒素B亚基的浓度为5μg/mL-1mg/mL，志贺毒素2e的B亚基的浓度为5μg/mL-1mg/mL。

优选的技术方案中，所述融合蛋白的浓度为90μg/mL-110μg/mL，不耐热肠毒素B亚基的浓度为5μg/mL-110μg/mL，志贺毒素2e的B亚基的浓度为5μg/mL-110μg/mL。

优选的技术方案中，所述融合蛋白是通过诱导表达携带融合蛋白编码基因的重组菌后得到；所述周质伴侣蛋白Skp和长链脂肪酸外膜转运蛋白Lomt分别是通过诱导表达携带相应蛋白编码基因的重组菌后得到。