[发明专利]一种特立帕肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种特立帕肽的制备方法，包括了它的合成与纯化，属于药物制备的领域。本发明通过1)在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和Fmoc‑Phe‑OH偶联得到Fmoc‑Phe‑树脂；2)通过固相合成法，按特立帕肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸得到全肽树脂；3)全肽树脂在32号氨基酸缩合时使用COMU作为缩合剂且每步合成过程中采用哌啶/Cl‑HOBT的DMF溶液作为脱保护剂；4)肽树脂裂解得到粗品，粗品经过初步纯化、精制及除盐等过程制得了特立帕肽，其工艺杂质中的消旋杂质D‑His³²‑特立帕肽含量小于0.1％。本发明提供了一种纯度高、成本低、适合规模化生产的特立帕肽制备工艺，此工艺既有效控制了工艺杂质又明显的提高了特立帕肽的总收率。

技术领域

本发明属于多肽药物领域，具体涉及一种特立帕肽的制备方法。

背景技术

特立帕肽(Cas No：52232-67-4)是一种由美国礼来公司开发的一种合成的多肽激素，主要用于治疗原发性及性腺功能减退性骨质疏松症、绝经后骨质疏松症。特立帕肽的分子式为C₁₈₁H₂₉₁N₅₅O₅₁S₂，其对应的分子量为4117.75，特立帕肽由34个天然氨基酸组成，其肽序为：H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-OH。礼来公司是采用基因表达得到特立帕肽，例如专利US6590081，然而，基因表达法有着技术门槛，工作复杂，三废严重等缺陷。中国专利CN102731643A公开了以CTC Resin为固相载体分为5个片段进行偶联，虽然该方法可以缩短合成周期，但是其总收率仅为32.2％。当下比较流行的合成方法为固相逐步合成法，该方法具有操作简单和设备要求低的优点，但是该方法也因为总收率较低而限制了特立帕肽的生产效率。如专利CN103467595A，其在逐步合成偶联到17位丝氨酸时，以未保护的丝氨酸和16位天冬酰胺羧基进行酯缩合，在获得粗肽后再将酯键转化为酰胺键，其总收率最高为42.1％。专利CN104017064A也公开了一种逐步合成方法，其在合成16-17位氨基酸时采用假脯氨酸二肽，并以特定的裂解液裂解，其总收率最高为38％。专利CN104530218A公开了一种逐步合成方法，以CTC Resin或Wang Resin树脂为固相载体合成，其总收率为34.72％。

L-His易消旋成D-His，因此，导致消旋杂质生成，即：D-His³²-特立帕肽。

D-His³²-特立帕肽的结构如下：H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-D-His-Asn-Phe-OH。该杂质的存在严重影响特立帕肽的含量以及使用安全。因此需要找到有效的方法将其去除并使其达到优质标准级别0.1％以下。现有的合成方法，制备特立帕肽发现现有技术存在的技术问题是：合成纯度偏低、成本高，特别是杂质D-His³²-特立帕肽含量较大，不适合规模化生产的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种收率高、杂质D-His³²-特立帕肽含量小的特立帕肽的制备方法。

一种特立帕肽的固相合成方法，其特征在于：

所述特立帕肽的氨基酸序列为：H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met