[发明专利]一种用于检测新疆地区食管鳞癌患者预后效果的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物学领域，涉及一种检测试剂盒，具体来是一种用于检测新疆地区食管鳞癌患者预后效果的试剂盒。

背景技术

食管癌在人类常见的十大恶性肿瘤排名中位居第九位，2012年全球肿瘤流行病统计数据(GLOBOCAN2012)数据显示全球食管癌年新增病例323008，死亡病例281217。中国是世界食管癌的高发地区，尤以男性患者为主，组织类型主要为鳞状细胞癌（简称食管鳞癌）。2012年出版的《中国肿瘤登记年报》的最新数据显示，我国食管鳞癌居恶性肿瘤发病第五位、死亡第四位，对公民的生活质量甚至生命安全构成了严重威胁。

准确预测食管癌患者的预后对于临床进一步的治疗和随访具有重要意义。然而，目前除了国际 TNM 分期外还没有一种简便有效的方法可以更加准确地预测食管癌患者的预后。TNM分期预测患者的预后比较繁琐，需要准确地评价肿瘤的浸润深度、转移淋巴结的个数、肿瘤有无远处转移等。

磷脂酶ε1（phospholipase C, epsilon 1，PLCEl）是最近几年以王立东教授为首的研究人员发现的食管癌的易感基因。由PLCE1基因编码的PLCE1蛋白是磷脂酶C（PLC）家族的新的一员，它除了包含PLC家族都有的结构域（PH、XY、C2和EF结构域）之外，还包含它独自特有的两个结构域（一个是位于C终端的Ras绑定域RAl和RA2，一个是N区RasGEF结构域）。另外有文章报道，激素、细胞因子、神经递质以及生长因子等分子都能激活PLCE1，水解细胞膜上的PIP2（磷脂酰肌醇4，5二磷酸）产生IP3（三磷酸肌醇，inositol trisphosphate)和DAG（二酰基甘油，diacylglycerol)两种重要的细胞第二信使，影响细胞的增值与分化。

IKB α蛋白（NF-kappa-B inhibitor α)是与多种炎症肿瘤的起始有关的NF-κB信号通路的抑制剂，是一种多效性的转录因子，可以与多种基启动子部位的KB位点发生特异性的结合从而促进其转录表达。有研究报道IKB α在B细胞淋巴瘤组织中高表达，是B细胞淋巴瘤的独立预后因子。

P53是人类最早被发现的抑癌基因，在大多数恶性肿瘤中，P53发生突变，是一种细胞凋亡的相关基因，并在其他基因的协助下增加了肿瘤细胞的侵袭能力，最终导致患者的生存期降低，所以在一定程度上对患者的预后有意。P53基因包括野生型和突变型。突变型P53蛋白相对于野生型P53蛋白的半衰期长，所以免疫组化方法观测到的蛋白多为突变型P53蛋白。

虽然上述每种蛋白均具有预测食管癌患者预后的能力，但把3种蛋白联合起来预测食管癌患者的预后则具有更强的判断效能，仅次于国际公认的 TNM 分期的预测能力。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于检测新疆地区食管鳞癌患者预后效果的试剂盒，所述的这种试剂盒要解决现有技术中检测新疆地区食管鳞癌患者预后效果的方法繁琐的技术问题。

本发明提供了一种用于检测新疆地区食管鳞癌患者预后效果的试剂盒，包括磷脂酶ε1蛋白、 IKB α蛋白和突变型P53蛋白。

进一步的，还包括0.01M柠檬酸盐缓冲溶液、10mM乙二胺四乙酸修复液、质量百分比浓度为3％的H₂O₂溶液、0.01M磷酸盐缓冲液、质量百分比浓度为5%的BSA封闭液、免疫组化Envision试剂盒和DAB显色试剂。

其中，上述的免疫组织化学方法主要是检测中性福尔马林固定和石蜡包埋的标本。

本发明所使用的检测方法为免疫组织化学Envision二步法。

进一步的，预测食管癌患者预后的方法包括如下步骤：标本经切片、脱蜡、水化后用Envision二步法检测目的蛋白的表达。

进一步的，预测食管癌患者预后的方法具体如下：切片经脱蜡至水、抗原修复、灭活内源性过氧化物酶和5%BSA封闭液封闭后，分别与一抗PLCE1、IKB α、P53在保湿盒内置于4℃孵育过夜 ；随后与Envision试剂A液37℃孵育后经DAB 显色和苏木素复染细胞核 ；最后经酒精脱水和二甲苯透明后用中性树胶封片，并对每张免疫组化染色切片进行评分。

进一步的，每种蛋白表达高低的 cut-off值由SPSS软件确定，其中PLCE1的cut-off值是4分，IKB α的cut-off值是4分，突变型P53的cut-off值是3分。