[发明专利]一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法及应用，属于医药技术领域。

背景技术

三七与人参、西洋参等人参属植物含有类似的化学成分，包括皂苷、黄酮、聚炔醇、多糖等，达玛烷型四环三萜皂苷为人参属药用植物的主要生理活性成分之一。迄今，已发现三七总皂苷及其一些单体化合物在心血管系统、神经系统、物质代谢以及抗炎、抗肿瘤等方面具有较好的药理活性，尤其是在神经系统方面的活性报道得越来越多。如三七总皂苷及单体皂苷Rb1、Rg1能显著增强小鼠的学习和记忆能力；三七总皂苷具有镇静、镇痛作用，它是一种阿片肽样受体激动剂，且没有成瘾性。人参总皂苷能够显著改善患有阿尔茨海默病小鼠的学习和记忆能力，其疗效相当于石杉碱A；人参皂苷Rg5具有很强的神经干细胞激活作用，可以诱导表皮生长因子反应神经干细胞定向分化成神经元细胞，并能够激活电压门控的钙离子通道，增加神经干细胞内的钙离子浓度。人参皂苷Rg5可用于研究神经细胞生成过程中的细胞信号转导途径，也可能开发成治疗神经系统疾病的新药。但是，人参皂苷Rg5是人参属植物中的微量成分，已报道的从人参属植物中分离出人参皂苷Rg5的得率仅有0.0027%，这极大地限制了人参皂苷Rg5开发利用。人参皂苷Rk1也是人参属植物中的微量成分，前期研究表明人参皂苷Rk1具有抑制端粒酶诱导细胞凋亡和阻断血管渗漏等生物活性。但是，没有人参皂苷Rk1对神经系统影响的报道。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法，能大幅度增加人参属植物中人参皂苷Rg5和Rk1的含量并能够得到分组皂苷和单体皂苷。

一种人参皂苷Rg5和人参皂苷Rk1的提取方法，具体步骤如下：

（1）将人参属植物原料进行蒸制处理，然后用溶剂回流提取得到提取液，其中溶剂为乙醇、甲醇或水；

（2）将步骤（1）所得提取液中的溶剂挥发得到提取物，将提取物溶解在溶剂B中得到B溶液，过滤除杂，再经大孔吸附树脂柱层析，用水洗脱至无糖分流出，再用洗脱有机溶剂C洗脱至无皂苷流出得到含人参皂苷Rg5和Rk1的总皂苷，其中溶剂B为水、含水甲醇、含水乙醇或含水丙酮；

（3）将人参总皂苷、三七总皂苷或人参皂苷Rb1进行蒸制处理；

（4）将步骤（2）所得总皂苷或步骤（3）所得蒸制产物溶解在有机溶剂D中得到总皂苷有机溶液，总皂苷有机溶液经大孔吸附树脂柱层析，用含水洗脱有机溶剂E洗脱，再用含水洗脱有机溶剂F洗脱至无皂苷流出得到人参皂苷Rg5和Rk1总含量大于97%的分组皂苷，其中有机溶剂D为乙醇或甲醇；

（5）纯化提取：将步骤（4）所得分组皂苷溶解在有机溶剂H中得到分组皂苷有机溶液，其中有机溶剂H为乙醇、甲醇，分组皂苷有机溶液经大孔吸附树脂柱层析，用含水洗脱有机溶剂I洗脱，再分别用浓度为70~71%的含水洗脱有机溶剂J、71~72%的含水洗脱有机溶剂K、72~73%的含水洗脱有机溶剂L、73~74% 的含水洗脱有机溶剂M、74~76%的含水洗脱有机溶剂N进行梯度洗脱至无皂苷流出，分别得到含人参皂苷Rg5和Rk1的流分，分别合并含人参皂苷Rg5和Rk1的流分得到人参皂苷Rg5流分和人参皂苷Rk1流分；

（6）将步骤（5）所得人参皂苷Rg5流分和人参皂苷Rk1流分分别重复进行步骤（4）的纯化提取过程得到含量大于90%的单体人参皂苷Rg5和含量大于90%的单体人参皂苷Rk1。

所述洗脱有机溶剂为乙醇、甲醇或丙酮；

所述步骤（1）中人参属植物原料与溶剂的固液比kg:L为1:(8~10)，回流提取的次数为3~5次，每次回流提取的时间为2~ 4 h；

所述步骤（2）中提取物与大孔吸附树脂的质量比为1:(1.5~2.0 )，大孔吸附树脂柱层析时B溶液的上样流速为0.5~1 BV/h，水洗脱时水的流速为2~3 BV/h、流量为2~3 BV，洗脱有机溶剂C洗脱时洗脱有机溶剂C的流速为1~2 BV/h；

所述步骤（4）中总皂苷或蒸制产物与大孔吸附树脂的质量比为1:(5~10)，含水洗脱有机溶剂E中有机溶剂E的质量百分数含量为 65~70%，含水洗脱有机溶剂F中有机溶剂F的质量百分数含量为 70~75%，含水洗脱有机溶剂E洗脱时含水洗脱有机溶剂E的流速为1~3 BV/h、流量为2~3 BV，含水洗脱有机溶剂F洗脱时含水洗脱有机溶剂F的流速为1~3 BV/h；