[发明专利]一种血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

氨基末端脑利钠肽前体(简称为NT-proBNP)来自心室肌细胞，最初合成的为前脑利钠肽原(pre-proBNP)，是由134个氨基酸组成的多肽链。前脑利钠肽原在心肌细胞中裂解为脑利钠肽前体(proBNP，108个氨基酸)和信号肽(26个氨基酸)。脑利钠肽前体(proBNP)进入血液后裂解为具有活性的BNP和NT-proBNP，理论上两者是1：1的关系。

BNP作用于参与钠调节、维持血压动态平衡的组织，促进尿钠排泄和利尿；扩张血管；拮抗肾素、血管紧张素、醛固酮系统的作用。BNP的产生和分泌可能为心脏的一种良性应激或者代偿机制，用来调节心脏的功能，BNP由于心室受到牵拉刺激或者张力升高而分泌，能够早期反映整体甚至局部心脏结构改变导致的功能变化。引起循环BNP和NT-proBNP水平升高的主要病理生理机制是左室整体收缩或舒张功能受损而使左室壁受到的牵拉力增加所致。此外，BNP和NT-proBNP水平升高不仅反映了室壁张力的增加，也是心肌缺血的直接后果，所以临床上将NT-proBNP作为理想的心衰标志物。

NT-proBNP的检测对心脑血管疾病的诊断及治疗有着重要的价值。可在无症状的患者中对早期/轻度心脏功能不全进行早期筛查；对心源性及非心源性呼吸困难的患者进行鉴别诊断；是心衰病人的诊断及临床预后最敏感的预测指标，还可以判断心衰患者对药物治疗的反应。

目前，通常采用免疫荧光双抗体夹心法定量检测人全血、血清或血浆中氨基末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)的浓度，上海飞测生物开发了的一种检测方法，其具体检测方法如下：

■检测试剂由测试卡、缓冲液、ID芯片和使用说明书组成，测试卡由试纸条和塑料盒组成；试纸条的主要成分：包被有NT-proBNP单克隆抗体和兔IgG的硝酸纤维素膜、吸水纸、PVC板及其他支持物；

■缓冲液含有荧光标记NT-proBNP单克隆抗体和荧光标记抗兔IgG；

■测试过程：吸取75微升样本，加入装有缓冲液的离心管中，充分混匀1分钟，从中吸取75微升加入测试卡的加样孔中，室温反应15分钟后，免疫荧光检测仪上读数；

■检测范围：0-22000pg/mL；

■批内精密度：变异系数CV≤15％。

但上述的检测方法存在1)加样量较多、2)测量范围窄、以及3)批内精密度差的缺陷，为心脑血管疾病的诊断及治疗带来一定困难。因此，对已有技术所存在的缺陷进行改进，使其在NT-proBNP临床检测时能够发挥更为有效的作用至关重要。

发明内容

本发明为解决现有技术中的上述问题，提出一种血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法及检测试剂盒，解决了NT-proBNP检测加样量较多的问题，在不降低灵敏度的情况下拉宽了检测范围，提高了产品批内精密度。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一个方面是提供一种血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法，包括步骤：

1)用链霉亲和素包被磁珠，得包被有链霉亲和素的磁珠；

2)用生物素标记氨基末端脑利钠肽前体单克隆第一抗体；

3)将步骤1)包被有链霉亲和素的磁珠与步骤2)标记有生物素的氨基末端脑利钠肽前体单克隆抗体结合反应，得磁珠-SA-生物素-NT-proBNP单抗溶剂；

4)用氨基末端脑利钠肽前体单克隆第二抗体标记吖啶酯，制得吖啶酯-NT-proBNP单抗溶剂；

5)将步骤3)制得的磁珠-SA-生物素-NT-proBNP单抗溶剂与NT-proBNP结合后，再与步骤4)制得的吖啶酯-NT-proBNP单抗溶剂发生结合反应，形成双抗体夹心复合物；

6)将该双抗体夹心复合物经清洗后，使形成带有可检测的信号生成物质，检测样本中氨基末端脑利钠肽前体的含量。

进一步地，在所述的血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法中，步骤1)中所述磁珠与所述链霉亲和素的质量比为1:5-1:50。

进一步地，在所述的血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法中，步骤2)中所述氨基末端脑利钠肽前体单克隆第一抗体与所述生物素的质量比为1:10-1:100。

进一步地，在所述的血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法中，步骤3)中所述磁珠包被链霉亲和素与所述生物素标记抗体的质量比为150:1-250:1。