[发明专利]一种检测鸭瘟病毒UL48基因的引物以及RT-PCR和荧光定量PCR检测方法

权利要求书

1.一种用于检测鸭瘟病毒UL48基因的引物，其特征在于，引物序列为：

UL48-F：5’-GCGGGAAATATCATCACGACT-3’；

UL48-R：5’-CATTCAATAAGACGACGCCAT-3’。

2.一鸭瘟病毒UL48基因荧光定量PCR检测用试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括独立分装的以下成分：SYBR Premix EX Taq^TMII、权利要求1所述的UL48-F、权利要求1所述的UL48-R、β-actin-F、β-actin-R、pMD18T-β-actin、pMD18T-UL48和RNase Free dH₂O；

其中，β-actin-F：5’-CCGGGCATCGCTGACA-3’

β-actin-R：5’-GGATTCATCATACTCCTGCTTGCT-3’；

pMD18T-β-actin通过以下方法制备得到：以鸭RNA为模板，采用引物β-actin-F和β-actin-R进行RT-PCR扩增，将扩增产物进行回收，与载体pMD18T连接，转化至DH5α大肠杆菌中，经筛选和鉴定，制得；

pMD18T-UL48通过以下方法制备得到：以鸭瘟病毒DNA为模板，然后采用引物UL48-全基因-F和UL48-全基因-R进行PCR扩增，将扩增产物进行回收，与载体pMD18T连接，转化至DH5α大肠杆菌中，经筛选和鉴定，制得；

UL48-全基因-F和UL48-全基因-R的序列为：

UL48-全基因-F：5’-GGATCCGATATGGATACATTTGATGAACTCGAC-3’；

UL48-全基因-R：5’-GAATTCTGTAGGCTAATTATCTGGCGAGAAC-3’。

3.根据权利要求2所述的鸭瘟病毒UL48基因荧光定量PCR检测用试剂盒，其特征在于，UL48-F和UL48-R的浓度为8μmol/L。

4.根据权利要求2所述的鸭瘟病毒UL48基因荧光定量PCR检测用试剂盒，其特征在于，β-actin-F和β-actin-R的浓度为10μmol/L。

5.根据权利要求2所述的鸭瘟病毒UL48基因荧光定量PCR检测用试剂盒，其特征在于，pMD18T-β-actin的拷贝数为3.95×10¹⁰copies/μL，pMD18T-UL48的拷贝数为1.80×10¹⁰copies/μL。