[发明专利]一种表面增强拉曼光谱检测平台及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种表面增强拉曼光谱检测平台的制备方法，其特征在于，所述表面增强拉曼光谱检测平台由聚多巴胺修饰的基底芯片和聚多巴胺修饰的表面增强拉曼光谱标记探针组成，制备具体步骤如下：

(1)聚多巴胺修饰的基底芯片的制备：0-50℃下，用浓度为0.1～50mg/mL的盐酸多巴胺溶液浸泡洁净的载玻片，反应0.5-24小时后，加入pH值为8-10的浓度为1mM-100mM的磷酸盐或三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲溶液，以及0.5-50μg/mL的抗体或5nM-100μM的适配体分子溶液，反应0.5-5小时，得到修饰有靶向分子的聚多巴胺基底芯片；记为PDA-chip，可用于捕获被检测物质；

(2)聚多巴胺修饰的SERS探针的制备：将SERS标记材料加入到0.1％-5％的牛血清白蛋白溶液中，混合均匀，反应0.5-24小时，离心分离，取沉淀，再用pH值为8-10的浓度为1mM-100mM的磷酸盐或三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲溶液分散沉淀，再加入浓度为0.1～50mg/mL的盐酸多巴胺溶液与浓度为0.5-50μg/mL的抗体溶液，混合均匀，反应0.5-5小时，再离心取沉淀，再用缓冲溶液或水溶液分散，即得到聚多巴胺修饰的表面增强拉曼光谱标记SERS探针，记做SERS-PDA Tag，可用作标记被检测物质的表面增强拉曼光谱探针；

其中，所述抗体为识别巨噬细胞迁移抑制因子或表皮生长因子受体具有癌症指示性作用的蛋白质的抗体。

2.一种由权利要求1所述的制备方法制备得到的表面增强拉曼光谱检测平台。

3.如权利要求2所述的表面增强拉曼光谱检测平台，在定量检测各种微量及痕量的环境污染物，生物标记物和其他物质中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，利用PDA-SERS platform检测胰腺癌细胞分泌的外泌体浓度，具体步骤为：

(1)对PANC-1胰腺癌细胞进行细胞培养，然后利用离心去除细胞保留含有外泌体的培养液，之后通过超速离心，从上清液中分离出外泌体；

(2)之后，通过流式细胞仪标定外泌体浓度，再将外泌体用1-50mM的PB缓冲液稀释，存放于4℃冰箱中备用；将外泌体用PBS缓冲液稀释成各个浓度的外泌体溶液，把不同浓度的外泌体溶液分别取2uL滴在PDA-chip上，10-50℃下反应0.5-5小时，之后用PBS缓冲液清洗，再加入20-500uL的SERS-PDA Tag反应0.5-5小时，之后再用PB缓冲液及去离子水冲洗，最后晾干待测；

(3)将与PDA-SERS platform作用后的各个浓度下的外泌体样品置于拉曼光谱仪下检测；每个样品检测1-1000个点，并计算均值；通过读取SERS Tag的信号中最强的拉曼峰的峰强度，并将峰强度与浓度对比，峰强度与浓度呈正相关；该PDA-SERS platform对PANC-1细胞系分泌的外泌体的检测所取得的信号的对数值，在外泌体浓度在5.44x10²至2.72x10¹⁰个/mL的范围内有良好的线性响应，且检测限为9x10^-19mol/L。