[发明专利]基于阳离子脂质体‑基因结合动力学的检测方法

权利要求书

1.一种阳离子脂质体-基因结合动力学的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)制备阳离子脂质体/基因复合物，阳离子脂质体与基因的质量比为8：1～1：1，将上述复合物在0～70min进行琼脂糖凝胶电泳实验，通过琼脂糖凝胶电泳成像系统软件定量分析阳离子脂质体结合基因的量；

(2)采用荧光染料分别标记阳离子脂质体与基因，按阳离子脂质体与基因的质量比8：1～1：1制备阳离子脂质体/基因复合物，构建荧光共振能量转移体系，采用荧光光谱仪检测阳离子脂质体与基因结合0～70min内复合物的发光强度；

(3)将核酸染料与基因结合，构建FRET体系，加入阳离子脂质体使其与核酸染料竞争结合基因，采用停流光谱仪检测阳离子脂质体与基因在0-200s内的瞬时结合动力学，得到结合动力学曲线，通过停流光谱仪分析软件进行线性拟合，得到结合动力学轨迹符合线性方程y＝-0.0004x+1.3657；其中，x代表结合时间，y代表结合后荧光变化，用电压表示。

2.根据权利要求1所述的一种阳离子脂质体-基因结合动力学的检测方法，其特征在于，所述的阳离子脂质体为氨基酸型阳离子脂质体、肽型阳离子脂质体、单价季铵盐阳离子脂质体和双子型季铵盐阳离子脂质体。

3.根据权利要求1所述的一种阳离子脂质体-基因结合动力学的检测方法，其特征在于，所述的基因包括质粒DNA、siRNA。

4.根据权利要求1所述的一种阳离子脂质体-基因结合动力学的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中用于标记阳离子脂质体的荧光染料为磷脂酰乙醇胺，标记基因的荧光染料为罗丹明123。

5.根据权利要求1所述的一种阳离子脂质体-基因结合动力学的检测方法，其特征在于，所述与基因结合的核酸染料为有机染料分子或溴化乙锭。

6.根据权利要求1所述的一种阳离子脂质体-基因结合动力学的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中发光强度的检测条件为：激发波长466nm，发射波长529nm，激发狭缝为1nm，发射狭缝为0.8nm，扫描范围为500-750nm。

7.根据权利要求1所述的一种阳离子脂质体-基因结合动力学的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中停流光谱仪检测的检测条件为：激发波长260nm，发射波长600nm，仪器恒温25℃。