[发明专利]短N导入片段在烟草中的应用及其筛选和估算方法

权利要求书

1.短N导入片段在烟草植株中的应用，所述短N导入片段与Coker176类型烟草的N导入片段相比减少了N基因右端至少0.93Mb的累赘基因组分；包含所述短N导入片段的烟草植株是通过包括以下步骤的方法筛选的：

a）利用N导入片段纯合的烟草植株与基因型为nn的烟草植株杂交，获得基因型为Nn的F1烟草植株，再将F1烟草植株与基因型为nn的烟草植株杂交，获得用于筛选短N导入片段的群体材料；

b）在步骤a）获得的群体材料的苗期接种TMV，在群体材料中筛选出表现枯斑的Nn基因型植株；

c）采用TN5.20引物对、TN5.34引物对、TN5.51引物对和N基因特异分子标记N1N2对步骤b）筛选出的Nn基因型植株进行基因型分型，筛选出N基因特异分子标记N1N2检测为阳性且TN5.20引物对、TN5.34引物对和TN5.51引物对检测均为阴性的植株；

其中，TN5.20引物对的序列为：

上游引物：5’- CGACTTTCAAAGGGAATCCA-3’，

下游引物：5’- TGCCTGCCAAGTGACTACAG-3’；

TN5.34引物对的序列为：

上游引物：5’-CACTTTGGCCTCTCACACAA-3’

下游引物：5’-AAACTTGTTCATAGTCTGCGAAT-3’；

TN5.51引物对的序列为：

上游引物：5’-TTCGGGTTTTTAGTTCGGTTT-3’，

下游引物：5’-AAACTTGTTCATAGTCTGCGAAT-3’；

N1N2的序列为：

上游引物：5’-CGTCGACACATTATGCCATC-3’，

下游引物：5’-GAGGGGTCTTACCCCATTGT-3’。

2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述短N导入片段与Coker176类型烟草的N导入片段相比减少了N基因右端至少1.56Mb的累赘基因组分。

3.根据权利要求2所述的应用，其得到选自以下的烟草植株：

a）N基因特异分子标记N1N2检测为阳性，且TN5.20引物对、TN5.34引物对和TN5.51引物对检测均为阴性的烟草植株；

b）N基因特异分子标记N1N2检测为阳性，且TN4.99引物对、TN5.20引物对、TN5.34引物对和TN5.51引物对检测均为阴性的烟草植株；

其中，TN4.99引物对的序列为：

上游引物：5’- TGCCACACAGGGTGACTAGA-3’，

下游引物：5’- AAGCAAAACTGTGTCATTAGGC-3’。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，所述短N导入片段通过染色体交换或基因组编辑的方法获得。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，所述烟草植株来源于烤烟、白肋烟、香料烟、晒晾烟和雪茄烟。