[发明专利]一种裂解液及其在保存组织或细胞、提取RNA中的应用

说明书

本发明公开了一种裂解液及其在保存组织或细胞、提取RNA中的应用，包括裂解液A和裂解液B，裂解液A包括异硫氰酸胍2‑4mol/L、氯化钠5‑10mmol/L、氯化钾10‑15mmol/L、氯化镁5‑10mmol/L，裂解液B包括异硫氰酸胍2‑4mol/L、亚精胺1‑5mmol/L、水饱和苯酚30‑40vt％、硫氰酸铵0.4‑0.5mol/L、甘油7‑8vt％，乙酸钠0.1‑0.5mol/L，SDS 0.2‑0.5wt％。本发明裂解液A可用于保存组织或细胞，当采用裂解液A和裂解液B提取RNA时，不需要对组织或细胞进行清洗，显著提高提取效率，并且各组分协同作用，提取的RNA纯度高、收率高，可实现实验室快速、低廉、高质量、规模化提取动物RNA的目的。

技术领域

本发明属于生物制剂技术领域，具体涉及一种裂解液及其在保存组织或细胞、提取RNA中的应用。

背景技术

提取核糖核酸(RNA)是分子生物学实验、临床分子诊断中经常需要进行的技术。所得RNA应用广泛，包括基因诊断、生物芯片分析、基因表达分析等。

组织块的保存方式直接影响以动物组织块为样品的RNA提取，主要的保存方式有液氮保存和RNA later溶液保存(RNAlater^TM Stabilization Solution)。但RNA later溶液与TRIzol、硅胶柱和磁珠法的化学成分不兼容，RNA later溶液中含有异硫氰酸铵，当组织块从RNA later溶液中取出用于提取RNA时，若未将组织块上带有的RNA later溶液清洗干净，则RNA later溶液中的异硫氰酸铵会与裂解液中的酚、SDS结合或反应生成沉淀，导致裂解液成分和浓度改变，裂解不彻底，降低RNA的纯度和收率。因此，采用RNA later溶液保存的组织或细胞在提取前通常需要进行反复地清洗，浪费时间和人力，降低提取效率。

目前，RNA的提取通常采用TRIzol法、硅胶柱和磁珠法等，但这些方法普遍存在RNA收率低、杂质污染严重的问题，不能满足后续基因诊断、生物芯片分析、基因表达分析等实验的质量要求。

此外，组织块的破碎过程也极大的影响着RNA的质量。常用组织块的破碎方法包括液氮研磨法、匀浆法(手工匀浆、机器匀浆、超声匀浆)和反复冻融法。液氮研磨法需要的组织块较大，且较难将组织块彻底打碎；匀浆法较难彻底抑制内源性RNA酶活性，容易造成内源性降解；反复冻融法的缺点也是难以彻底裂解大块组织，且内源性RNA酶活性难以抑制。因此，对动物源性组织块的RNA提取存在操作复杂、破碎不完全、内源性RNA活性难于抑制等困难，造成RNA的提取质量及产量难以保障。

发明内容

本发明的目的在于：针对上述现有提取RNA的裂解液与RNA later溶液成分不兼容，导致组织或细胞在提取RNA前需反复清洗，使得提取效率低下的问题，本发明提供一种裂解液及其在保存组织或细胞、提取RNA中的应用。

本发明采用的技术方案如下：

一种裂解液，包括裂解液A，所述裂解液A包括异硫氰酸胍2-4mol/L、氯化钠5-10mmol/L、氯化钾10-15mmol/L、氯化镁5-10mmol/L，裂解液A的pH为7-7.5。

所述裂解液A在保存组织或细胞中的应用。裂解液A的主要成分为异硫氰酸胍，异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。当采用裂解液A保存组织或细胞时，由于异硫氰酸胍浓度较低，可起到轻微的裂解作用，使得组织或细胞在由氯化钠、氯化钾和氯化镁组成的等渗体系中被异硫氰酸胍轻微裂解后于表面形成乳化膜，乳化膜可对组织或细胞起到保护作用，因此，可取代传统的RNA later溶液。