[发明专利]一种检测EB病毒的多重荧光定量PCR方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测EB病毒的多重荧光定量PCR引物和探针，其特征在于，包括检测EBNA1基因的引物对EB-F/R和探针EB-VIC，检测Bam HI-W基因的引物对BW-F/R和探针BW-FAM及检测内参基因β-actin的引物对UF/R和探针TU-ROX，其序列依次如SEQ ID NO：1～9所示；所述EBNA1基因，Bam HI-W基因和内参基因探针的5’端分别标记有荧光素VIC，FAM和ROX。

2.权利要求1所述引物和探针在检测EB病毒的非疾病诊断目的或在制备EB病毒检测试剂盒中的应用。

3.一种检测EB病毒的非疾病诊断目的的多重荧光定量PCR方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.提取样本基因组DNA；

S2.用权利要求1所述引物和探针SEQ ID NO：1～9对S1的基因组DNA进行多重荧光定量PCR扩增反应，得到PCR扩增曲线；

S3.根据S2的扩增曲线进行结果分析。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S2所述多重荧光定量PCR的扩增体系中各组分总浓度如下所示：10x ExTaq bμffer 1x～5x，MgCL₂ 0.2～2mmol/L，dNTP 100～400μmol/L，BSA 100～300μg/μL，甜菜碱1～3mol/L，EB-F 8pg/μL，EB-R 8pg/μL，EB-VIC4pg/μL，BW-F 4pg/μL，BW-R 4pg/μL，BW-FAM 2pg/μL，UF 2pg/μL，UR 2pg/μL，TU-ROX 1pg/μL，ExTaq酶0.1～0.2U/μL，ddH₂0补充至25μL。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S2所述多重荧光定量PCR的扩增程序为：95℃5min；94℃30s，62℃30s，共45个循环。

6.权利要求3～5任一所述方法在制备EB病毒检测试剂盒中的应用。

7.一种检测EB病毒的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述引物和探针。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包含EB病毒阳性质粒。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包含荧光定量PCR所需的试剂。

10.权利要求7～9任一项所述试剂盒在EB病毒检测中的非疾病诊断目的的应用。