[发明专利]一种同步测定乳粉中L-抗坏血酸、D-抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的方法

说明书

本发明提供一种同步测定乳粉中L‑抗坏血酸、D‑抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的方法，其中提取液使用除氧的硫代硫酸钠和偏磷酸混合溶液，可以有效保护活性抗坏血酸，提高其稳定性，无需避光操作，实验操作简便，提取物在低温条件下24h内性质稳定。本发明所涉及的色谱条件对色谱柱损伤较小，可延长色谱柱寿命；流动相由磷酸二氢钾和癸胺构成，其浓度可以提高分离度，抗坏血酸浓度较高时，仍可以使2种同分异构体有效分离，避免彼此干扰，可准确测定活性抗坏血酸的含量。本发明操作简单、化学试剂用量少、提取物稳定性好。检测方法相对标准偏差为7.82％、可以多联检测，对于准确测定乳粉中活性抗坏血酸的真实含量具有重要意义。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种同步测定乳粉中L-抗坏血酸、D-抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的方法。

背景技术

维生素C(又称L-抗坏血酸，L-AA)，是人体每日膳食推荐供应量最大的一种维生素，人体自身不能合成，主要从食物中摄取。L-抗坏血酸有还原型和脱氢型两种，还原型极不稳定，易被氧化成为脱氢型抗坏血酸(DHA)。D-抗坏血酸(D-AA)是L-AA的光学异构体，常被用作食品添加剂，然而其活性只有L-AA的5％。因此，要准确测定乳粉中抗坏血酸的含量，评价其抗氧化价值，需要将L-AA、D-AA、DHA区分测定。

目前，抗坏血酸的测定方法主要有碘量法、2,6-二氯靛酚滴定法，电化学分析法，苯肼比色法，荧光法等，以上方法只能检测总抗坏血酸的含量,而没有区分L-AA、D-AA、DHA的含量。现行高效液相色谱法可以区分测定L-AA、D-AA、DHA，但由于抗坏血酸的稳定性差，整个检测过程需要避光，操作繁琐。样品提取方法繁琐、提取物稳定性差、同分异构体L-AA和D-AA化学性质相似，色谱分离不佳等问题是目前液相色谱法测定抗坏血酸的关键问题所在。

而乳粉中抗坏血酸含量一般较高，因此要求色谱条件在抗坏血酸浓度较高时，可以有效分离L-AA与D-AA。使用现行的色谱条件测定乳粉中L-AA、D-AA、DHA通常存在随着抗坏血酸浓度升高，L-AA与D-AA分离度降低，甚至出现平顶峰，保留时间漂移的问题，不利于精确定性和定量(图1)。

发明内容

本发明针对上述问题，提供一种同步测定乳粉中L-抗坏血酸、D-抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的方法，本方法具有无需避光操作、线性范围广、化学试剂用量少、提取物稳定性好、回收率高、检测限低、检测结果重现性强、多联检测的优点，对于测定乳粉中活性抗坏血酸的真实含量具有重要意义。

本发明同时测定乳粉中L-AA、D-AA、DHA的方法，包括如下操作步骤：

1)样品预处理：

A液制备：称取待检测的乳粉样品置于具塞离心管中，加入经过氮吹除氧的提取液，涡旋溶解并定容；摇匀，超声波处理后离心，吸取部分上清液，另一部分用于制备B液，经水相膜过滤后转移至棕色瓶中，用于测定L-抗坏血酸和D-抗坏血酸含量；

所述的提取液由偏磷酸和硫代硫酸钠构成，偏磷酸浓度为0.25mol/L，硫代硫酸钠浓度为0.019mol/L；

所述超声波处理条件为冰浴超声3秒、间歇5秒，90～100个循环；

所述离心条件为0℃、9000r/min离心5min；

所述的水相膜为0.22μm水相膜；

B液制备：取A液制备中的离心后的上清液于具塞离心管中，加入还原剂，调节pH至7.0～7.2，振荡；再调节pH至2.5～2.8，最后用纯水定容后，溶液经过水相膜过滤后转移至棕色瓶中，用于测定L-抗坏血酸的总量；

所述的还原剂为浓度为0.177mol/L L-半胱氨酸溶液；

所述的调节pH至7.0～7.2，是使用磷酸三钠溶液调节pH至7.0～7.2；