[发明专利]一种试剂盒聚丙烯酰胺凝胶电泳制胶和排枪交叉高通量点样方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及一种高通量聚丙烯酰胺凝胶电泳方法。

背景技术

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是一种常用的DNA检测方法，对于小于500 bp的DNA片段分辨率极高，长度仅仅相差0.2%的DNA分子也可被分开，非琼脂糖凝胶所能达到。同时聚丙烯酰胺凝胶电泳也能分析蛋白质样品。因此聚丙烯酰胺凝胶电泳在分子生物学及相关学科的基础和临床研究中得以广泛的应用。但其制备、操作较繁琐，电泳结束后染色过程也较为费时、费力、通量低，不能满足对大量样品进行高通量 DNA 指纹鉴定的需求。

常规聚丙烯酰胺凝胶制胶的步骤，溶液配方见表1，共有5种化学试剂/混合试剂。

表1

试剂加入体积（ml）1500ml丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺=29：113.32Tris-硼酸(5×TBE)103过硫酸铵（AP）10%0.754四甲基乙二胺（TEMD）0.035双蒸馏水（dd Water）25.5Total50

Step1: 把胶板固定在电泳槽中。

Step2: 凝胶制配：将上述表一中的5种试剂，以此按不同比例配方混合，需要量取5次，注意AP药品要最后加入，加入后立即倒胶入胶板中，（因加入AP之后会很快凝固）然后立即插上梳子。

Step3: 待AP胶凝固，向电泳槽中倒入1×TBE缓冲液，浸没胶孔，然后拔掉梳子，点入扩增好的DNA样品。

Step4:插上电源，电泳40min。

正因为聚丙烯酰胺凝胶电泳的广泛应用，但存在操作繁琐的缺点。许多科研工作者为改良该方法做了很多研究工作(张秀华等,2009)。艾鹏飞等（2011）利用杏微卫星标记，确定聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为，聚丙烯酰胺凝胶的浓度为 6%，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为 29：1。乐晓萍等（2001）对变性及非变性聚丙烯酰胺凝胶银染方法最适条件进行探讨和改良。

随着技术进步，毛细管凝胶电泳 ( CGE )技术出现，并快速发展。在此基础上，荧光标记-DNA 分析仪检测技术、标准分子量样品（内标）以及利用软件进行图像收集和分析，实现了 电泳高效、自动化技术的结合，比目前广泛采用的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测技术准确性更高、重复性更好。但其相关仪器设备投入的较高，化学试剂也较贵，一般普通实验室购置不起（郝晨阳等，2005；郑永胜等，2014）。