[发明专利]一种药用鹿茸细胞的提取培养及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及细胞人工培养技术领域，具体为一种药用鹿茸细胞的提取培养及制备方法。

背景技术

鹿茸细胞是自然界中一种特殊的哺乳动物细胞，在鹿体上正常分裂速度超过癌细胞。我国人民发现鹿茸药用已经有悠久历史，其临床疗效，保健作用卓著。现代医学研究确证了鹿茸的活性物质和药理机制，国内外备受推崇。

鹿茸生产有史以来均依赖于野生猎取或以人工家养方式获得鹿茸，但是受自然界和养殖条件束缚，质量优劣悬殊，生产水平有限。鉴于此，我们提出一种药用鹿茸细胞的提取培养及制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药用鹿茸细胞的提取培养及制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种药用鹿茸细胞的提取培养及制备方法，包括以下步骤：

步骤1)选取细胞种子：从千头以上的鹿种群中挑选健康强壮的质量突出的个体，并且检查无疾病，在其最佳生长时期提取原代细胞，进行细胞培养；

步骤2)细胞接种培养：将原代细胞接种到第一细胞培养瓶中进行细胞培养，且第一细胞培养瓶中放置有细胞培养基，经过严格选拔，找出理想细胞进行大量增殖，且进行不同代数观察和保存；

步骤3)悬浮培养：将理想细胞转移至第二细胞培养瓶中，且第二细胞培养瓶中放置有细胞生长液，使细胞生长液保持在适宜的时间、温度、PH、通气量、转速以及溶解氧等条件下进行传代培养，得到理想细胞量，并在低温条件下保存；

步骤4)将上述得到理想细胞量置于低温条件下保存。

优选的，所述步骤1)中的鹿种群为梅花鹿或马鹿，最佳生长周期为2-6 周岁的幼鹿生长点，提取方式为无菌手术机械法。

优选的，所述步骤2)中的细胞接种量为10³-10⁷个/毫升培养基。

优选的，所述步骤2)中的细胞培养基配方为：

优选的，所述步骤3)中的细胞生长液配方为：

优选的，所述新生动物血清选用马血清、牛血清、狗血清、人员血清中的一种或几种。

优选的，所述步骤3)中的培养时间为5-10天，温度为35-37℃，PH为 7.1-7.3，空气饱和通气量0.1Lpm-0.3Lpm，转速为60-90rpm，溶解氧55％-60％。

优选的，所述步骤3)中的传代数为50-200代。

优选的，所述步骤4)中的低温条件为-75℃至-185℃。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本一种药用鹿茸细胞的提取培养及制备方法，操作简单，成本较低，生产周期快，并且生产出的产品具有天然鹿茸的相同药理作用，本发明人经过十几年的反复试验，多次选择，独创了鹿茸物质生产新方式，使其产品完全达到“腊片”水平，经济开发源力深远。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一

本发明提供一种技术方案：一种药用鹿茸细胞的提取培养及制备方法，包括以下步骤：

步骤1)选取细胞种子：从千头以上的鹿种群中挑选健康强壮的质量突出的个体，并且检查无疾病，在其最佳生长时期提取原代细胞，进行细胞培养；

步骤2)细胞接种培养：将原代细胞接种到第一细胞培养瓶中进行细胞培养，且第一细胞培养瓶中放置有细胞培养基，经过严格选拔，找出理想细胞进行大量增殖，且进行不同代数观察和保存；

步骤3)悬浮培养：将理想细胞转移至第二细胞培养瓶中，且第二细胞培养瓶中放置有细胞生长液，使细胞生长液保持在适宜的时间、温度、PH、通气量、转速以及溶解氧等条件下进行传代培养；

步骤4)将上述得到理想细胞量置于低温条件下保存。

作为本发明一实施例，所述步骤1)中的鹿种群为梅花鹿，最佳生长周期为2周岁的幼鹿生长点，提取方式为无菌手术机械法。

作为本发明一实施例，所述步骤2)中的细胞接种量为10³个/毫升培养基。

作为本发明一实施例，所述步骤2)中的细胞培养基配方为：

作为本发明一实施例，步骤3)中的细胞生长液配方为：