[发明专利]一种筛选具有拮抗空肠弯曲杆菌感染功能的乳酸菌的方法

说明书

本申请人提供了一种筛选具有拮抗空肠弯曲杆菌感染功能的乳酸菌的方法，包括如下步骤：(1)秀丽隐杆线虫的同期化培养；(2)C.jejuni及乳酸菌的培养及菌悬液的制备；(3)具有拮抗C.jejuni感染功能的乳酸菌筛选。本发明首先建立C.jejuni感染线虫模型，并用该模型对具有拮抗C.jejuni感染效应的乳酸菌进行筛选。经过与寄生虫C.jejuni共感染模型小鼠实验结果对比，确认该秀丽隐杆线虫模型筛选具有体内拮抗C.jejuni感染功能乳酸菌具有快速、准确的优点。

技术领域

本发明涉及益生菌筛选技术领域，尤其是涉及一种利用秀丽隐杆线虫模型快速筛选具有拮抗空肠弯曲杆菌感染功能的乳酸菌的方法。

背景技术

空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)为革兰氏阴性菌，属于弯曲杆菌属。C.jejuni广泛分布于自然界，可通过动物、食物、水、牛奶等传播，能定植于各种野生动物和家禽、家畜的肠道内。接触禽畜类，食入未煮熟或受污染的鸡肉、牛肉、未彻底杀菌的牛奶以及污染的水都可以引起人类感染。近些年来，空肠弯曲杆菌感染率在世界各地普遍呈上升趋势。在一些发达国家，空肠弯曲杆菌感染引起的腹泻病例数甚至超过了沙门氏菌和志贺氏菌，成为最常见的腹泻致病菌。在发展中国家，空肠弯曲杆菌是婴幼儿感染性腹泻最常见的病原菌。人感染空肠弯曲杆菌后，最常见的会引起肠胃炎、腹泻、发烧以及腹部绞痛，免疫力低下者会进一步引起一系列的并发症，例如胆囊炎、腹膜炎、脑膜炎、败血症和骨髓炎等。空肠弯曲杆菌引起的最严重的并发症是格林-巴利综合征(Guillian-Barré Syndrome,GBS)，它会引起轴突的损伤及不可逆的神经伤害，导致呼吸肌麻痹而死亡。

目前临床治疗C.jejuni感染的常用手段为抗生素，但抗生素的使用会带C.jejuni及肠道菌对抗生素的耐药性，抗生素过度使用还会导致体内抗生素的残留。利用益生菌替代抗生素干预并治疗消化道细菌感染已经成为国内外食品科学与生物医药研究的一个重要领域。研究表明乳酸菌能在体内、外能有效干预C.jejuni的感染。乳酸菌干预C.jejuni感染的机理主要包括：乳酸菌能够产生抗菌物质抑制C.jejuni的生长；粘附性高的乳酸菌可以通过空间位阻效应或者产生抑制物质来抑制C.jejuni对宿主细胞的粘附；乳酸菌对肠道形态的完整性具有显著的保护作用，从而减轻C.jejuni对肠道上皮的感染症状；乳酸菌还可以向细胞外分泌一些具有免疫调节活性的物质，如胞外多糖和其它分泌蛋白，这些成分参与免疫调节或直接引起免疫应答，从而在抑制细菌定植等方面发挥作用。

迄今为止，对乳酸菌拮抗C.jejuni的研究主要涉及体外及体内证据。就体外而言，主要集中于乳酸菌抑菌活性成分分析、抑菌物质对C.jejuni毒力基因表达的抑制、乳酸菌对C.jejuni粘附和侵袭细胞的抑制等。然而某些体外实验效果良好的菌株在动物体内拮抗C.jejuni的效果却不尽如人意，体外实验的结果往往不能代表乳酸菌在体内拮抗C.jejuni感染的作用。而对于动物模型，研究多集中于禽类及小鼠。禽类感染模型是研究C.jejuni在体内定植的良好模型，但在模拟C.jejuni感染所导致的一系列病理症状和免疫反应方面并无优势，且造模时间一般在1-2月。而正常小鼠体内固有肠道菌群所产生的“定植抗性”阻止了C.jejuni在小鼠体内的有效定植，因此普通小鼠C.jejuni感染模型难以成功，因此多采用寄生虫共感染的方法或利用基因敲除小鼠构建C.jejuni的感染模型，然而以上两种模型或危险性较高或操作复杂且造价昂贵，且造模时间也多在4-6周。因此，用家禽、小鼠等动物造模筛选具有体内拮抗C.jejuni感染功能的乳酸菌均存在代价高、周期长、操作较繁琐、免疫应答指标不显著等缺点，不适用于功能性乳酸菌的大规模快速筛选。