[发明专利]一种黄霉素的提取工艺

说明书

本发明公开了一种从黄霉素发酵液中工业化提取生产黄霉素的工艺。本发明以黄霉素的发酵液为起始原料，经过发酵液预处理及过滤，收集富含黄霉素的滤液,再经非极性或弱极性有机溶剂萃取、反萃取、脱色、纳滤、喷干等步骤，获得白色至类白色生物效价1200‑1600 u/mg的黄霉素精品。生产总收率80%以上。本发明使用常用工业原料和设备，工艺简单，收率高，成本低，适合连续化工业生产。

技术领域

本发明属于生物工程下游的提取纯化技术领域，尤其是涉及一种从发酵液中提取黄霉素精品的提取工艺。

背景技术

黄霉素(Flavomycin)又称莫诺霉素(moenomycin)、斑驳霉素(bambermycin)、黄磷脂素(flavophospholipol)，是一种多组分的动物用抗生素，有五个主要组分A、A₁₂、C₁、C₃、C₄，商品黄霉素中A组分含量比例最大，一般在60-80％之间。

黄霉素A的经验分子式为：C₆₉H₁₀₇N₄O₃₅P，分子量为1582g/mol。黄霉素的化学结构式：

目前黄霉素的生产企业都是生产含黄霉素20-250u/mg(相当于含量2-25％)的粗品，然后再添加辅料配成含量为4％、8％、12％的兽用预混剂使用。由于粗品中含有微生物长期培养发酵产生的大量代谢副产物，杂质成分复杂，稳定性差，人在生产过程中接触黄霉素粗品易产生咳嗽、高烧、腹泻等不良过敏反应，但机理不明。黄霉素精品本身的毒性小，精品配制成的预混剂，给动物饲用可改善口感，更会显著减少毒副作用，促生长效率更高，是以后兽用预混剂的发展趋势。专利US6077830报道，黄霉素的锚盐可以治疗和预防胃病，提示黄霉素精品将来也可以用于人类用药；而黄霉素精品大规模生产的工艺尚未见报道。

国内专利CN1683549A公开了一种莫诺霉素(即黄霉素)的提取方法即从发酵菌丝体中用甲醇等极性溶剂提取后，再用硅胶柱和硅酸镁及Rp-18柱层析进行三步色谱分离纯化的在实验室中制备标准品的方法，该方法中大量使用甲醇、石油醚、丁醇、乙腈等溶剂或其混合物进行除盐、脱色、梯度洗脱或洗涤、层析等纯化方式，不适合进行大规模工业化生产。国内外其他专利则主要是关于默诺霉素A或默诺霉醇从多组分混合物中分离纯化的方法，工艺也都是采用极性溶剂进行固液提取和多种色谱柱或离子交换树脂或大孔树脂等联合使用进行分离纯化的方式，也只能在实验室少量制备，分离的效率和收率更低，生产成本更高，不适合大规模工业化生产。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种可以连续化大生产，生产过程简单，提取收率高，产品纯度高的黄霉素的提取工艺。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：一种黄霉素的提取工艺，包括以下步骤：

1)预处理：取黄霉素发酵液，碱化至pH值为8-12，过滤发酵液后收集获得富含黄霉素的滤液A；

2)溶媒萃取：向滤液A中加入有机溶剂，调节至pH值为1-4，间歇搅拌萃取，静置分层，将下层水相分离获得萃取液B；

3)反萃取、洗涤：向萃取液B中加入水或氯化钠溶液搅拌混合洗涤，静置分层，除去含有色素和杂质的水层，加入等体积无盐水，调节至pH值为6-12，继续间歇搅拌12-18分钟进行反萃取，静置分层，获得富含黄霉素的水层提取液，向水层提取液中添加有机溶媒，搅拌洗涤除杂，静置分层，获得下层的富含黄霉素的水层提取液C；

4)纳滤、喷干：水层提取液C用纳滤膜纳滤截留获得富含黄霉素的浓缩液，浓缩液喷雾干燥获得白色或类白色的黄霉素。

作为优选，所述步骤1)发酵液经碱化至pH值为8.5-9.5，采用固体氢氧化钠，或采用固体氢氧化钠配成的溶液，或采用工业液碱，或采用工业液碱配成的稀溶液。