[发明专利]一种黑骨藤指纹图谱的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种黑骨藤指纹图谱的建立方法，属于药品技术的领域；

背景技术

黑骨藤，系萝藦科科(Asclepiadaceae)植物黑龙骨(Periploca forrestii Schltr.)的干燥根或全株，具有通经、活血、解毒和祛风等功效，用于治疗风湿关节痛、跌打损伤、月经不调。黑骨藤是常用苗药之一，是黑骨藤追风活络胶囊、黑骨藤伸筋透骨液、黑骨藤伸筋透骨喷雾剂的重要组成药味，是《贵州省中药材、民族药材质量标准》(简称《质量标准》)2003年版收载品种。

黑骨藤作为贵州十大苗药之一，由于基础研究比较薄弱，其质量评价体系还不够完善，这严重影响了它的现代化进程。在2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》中，黑骨藤项下的质量控制仅有性状、粉末和理化鉴别，质量控制方法较为简单，已无法满足现代基于功效组分进行中药品质评价需求。

中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性，能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，是国际公认的一种控制中药及其制剂质量的有效方法。

本文在申请人前期工作基础上，建立黑骨藤的指纹图谱，为黑骨藤基于功效组分的品质评价方法建立提供理论依据。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种黑骨藤指纹图谱的建立方法；该方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点；为黑骨藤基于功效组分的品质评价方法建立提供理论依据。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案实现：一种黑骨藤指纹图谱的建立方法，所述指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：称取杠柳毒苷对照品8.00～8.50mg，置于10mL容量瓶中，加入甲醇，使其充分溶解，摇匀，用甲醇定容，配制成质量浓度为0.80～0.85mg·mL^-1的对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：称取黑骨藤样品1.5～2.5g，按料液比1:20～1:30加入65％～75％乙醇溶液45～55mL，加热回流提取2～4次，每次50～70min；提取液于70℃水浴蒸干，加20～30mL蒸馏水使成混悬液；分别依次用和混悬液等量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取2～4次，取正丁醇萃取部位，浓缩至干，残渣用适量甲醇溶解，转移并定容置于10mL容量瓶中，摇匀，0.40～0.50μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；

(3)色谱条件：色谱柱：Xtimate C₁₈(250mm×4.6mm,5μm)；检测波长：200～240nm；柱温：20～30℃；进样量：10μL；流动相：乙腈-0.05％～0.15％磷酸水溶液，梯度洗脱，流速：0.8～1.2mL·min^-1；

(4)指纹图谱的制作：按上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样，记录谱图得到黑骨藤指纹图谱；

(5)指纹谱图的确认：按照上述提供的方法，对多批次黑骨藤建立了指纹图谱，通过分析比较确定了16个共有峰，这些共有峰构成了黑骨藤的指纹特征，作为黑骨藤的指纹图谱。

前述的黑骨藤指纹图谱的建立方法中，所述供试品溶液这样制备：称取黑骨藤样品2.0g，按料液比1:25加入70％乙醇溶液50mL，加热回流提取3次，每次60min；提取液于70℃水浴蒸干，加25mL蒸馏水使成混悬液；分别依次用等量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，取正丁醇萃取部位，浓缩至干，残渣用适量甲醇溶解，转移并定容置于10mL容量瓶中，0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

前述的黑骨藤指纹图谱的建立方法中，所述梯度洗脱是；按下表梯度程序进行梯度洗脱：

前述的黑骨藤指纹图谱的建立方法中，所述16个共有峰，以14号峰(杠柳毒苷)为参照峰，其余峰相对保留时间分别为0.0848～0.0849，0.2027～0.2034，0.2811～0.2815，0.3068～0.3080，0.4248～0.4259，0.5747～0.5760，0.7122～0.7148，0.8173～0.8189，0.8362～0.8376，0.8876～0.8881，0.9099～0.9109，0.9366～0.9371，0.9844～0.9846，1.0000～1.0121，1.2837～1.2848。