[发明专利]抑制细菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的脱氧核酶及其应用

说明书

本发明属于微生物耐药性研究技术领域，具体提供一种抑制细菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的脱氧核酶(DNAzyme)，所述脱氧核酶为DNA片段Dz136或Dz341，Dz136的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，Dz341的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还进一步提供了所述脱氧核酶在抑制细菌耐药性以及制备抑制qnrD基因阳性细菌耐药性的试剂中的应用。本发明开创性的利用DNAzyme抑制质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的表达，通过新设计的脱氧核酶Dz136或Dz341，在喹诺酮类抗生素条件下，能够显著抑制细菌菌株的生长速度，Dz341导入后菌株生长速度变缓慢，进入对数生长期的时间延长了4.5小时。

技术领域

本发明属于微生物耐药性研究技术领域，具体涉及一种抑制细菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的脱氧核酶及其应用。

背景技术

近年来研究发现，质粒介导的细菌对氟喹诺酮药物的耐药性也发挥着重要作用，并且检出率呈上升趋势。由于其重要的临床意义，PMQR迅速成为近几年研究的热点之一。尤其值得关注的是Cavaco L.M等首次从沙门氏菌当中发现了一个新的PMQR基因，命名为qnrD。该基因编码214个氨基酸，与qnrA1，qnrB1和qnrS1的同源性分别为48％、61％和41％。而在其他种属的细菌中还没有该基因的相关报道，也还没有该基因功能研究相关的报道。

脱氧核酶(deoxyribozyme，DNAzyme)是利用体外分子进化技术获得的一种具有催化功能的单链DNA片段，能特异性识别靶mRNA，并将其切断。当前，DNAzyme的应用主要集中在对肿瘤和病毒复制过程的抑制的研究上，将脱氧核酶应用于抑制细菌耐药性的报道极少。

基于以上技术背景，如何通过对脱氧核酶的结构进行设计改造，使得其能够应用于抑制细菌耐药性，是一个亟待深入研究的课题。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种抑制细菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的脱氧核酶，基于所述抑制细菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的脱氧核酶，本发明的另一目的是提供其应用。

本发明所采用的技术方案为：

根据本发明的具体实施方式，本发明的抑制细菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的脱氧核酶为DNA片段Dz136或Dz341，Dz136的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，Dz341的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。

根据本发明的具体实施方式，本发明的抑制细菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的脱氧核酶中，DNA片段Dz136或Dz341的两端经硫代磷酸化修饰处理。进一步优选的，DNA片段Dz136或Dz341的5′和3′端的各2个磷酸二酯键进行硫代修饰。

基于前述本发明所提供的抑制细菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的脱氧核酶，根据本发明的具体实施方式，本发明还提供了所述脱氧核酶的应用，所述脱氧核酶可以应用于抑制细菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD，相应的可应用于制备抑制qnrD基因阳性细菌耐药性的试剂，所述细菌优选为大肠杆菌。当用于制备抑制qnrD基因阳性细菌耐药性的试剂时，所述脱氧核酶的浓度为0.1μmol/L～1.6μmol/L。进一步的，根据本发明的具体实施方式，本发明还提供了所述脱氧核酶在制备抑制qnrD基因阳性细菌生长的试剂中的应用，具体的，所述抑制细菌生长的试剂中优选包含有喹诺酮类抗生素，所述喹诺酮类抗生素优选为环丙沙星。

基于前述技术方案，本发明的有益效果为：本发明开创性的利用DNAzyme抑制qnrD基因的表达，通过新设计的脱氧核酶Dz136或Dz341，在喹诺酮类抗生素条件下，能够显著抑制细菌菌株的生长速度，Dz341导入后菌株生长速度变缓慢，进入对数生长期的时间延长了4.5小时。本发明为质粒介导细菌对氟喹诺酮类药物耐药性的控制提出了新的思路，具有较好的进一步开发及应用前景。

附图说明