[发明专利]一种鱼类免疫试剂

说明书

本发明公开了一种鱼类免疫方法，包括两步：浸泡免疫：先用鱼体表面处理液清洗鱼体，后用疫苗浸泡液浸泡鱼苗。每1L表面处理液含有0.05‑2mL38‑40wt％的甲醛溶液，0.001‑0.0035g苯扎氯胺，0.04‑0.08g乙醇酸和10‑20mL甘油；每1L疫苗浸泡液含有50‑200mL 0.01‑0.1％的卡波姆，1‑5mL的三乙醇胺，10‑20mL的甘油和1×10⁶‑1×10⁸CFU/mL的疫苗抗原；口服免疫：浸泡免疫后的鱼苗隔12‑48h后饲喂口服疫苗饲料。通过浸泡免疫与口服免疫的配合应用，提高鱼体表皮的通透性，增加鱼体对疫苗抗原的吸收效率，提高免疫效果，相对免疫保护率提高10％以上。

技术领域

本发明涉及水产养殖技术领域，尤其涉及一种鱼类免疫方法。

背景技术

近几十年来，鱼用疫苗的发展相当迅速，在水产养殖中发挥的作用越来越大，疫苗的种类日益增多，分类方式也多种多样。按免疫方式分为注射疫苗、浸泡疫苗和口服疫苗；按疫苗抗原成分类型分为菌体疫苗、亚单位疫苗、重组疫苗和DNA疫苗等，按照抗原制备方式分为灭活疫苗、减毒疫苗、基因缺失疫苗等。目前鱼用疫苗的接种方法主要有三种：一是注射，二是浸泡，三是口服。注射法虽剂量准确，诱导免疫应答比其它几种方法都强，但注射免疫费时费力，鱼的应激反应也大，对鱼苗和较小的鱼类并不适用；浸泡免疫省时方便，是仅次于注射法的有效给药途径，并且可适用于难以实施注射的鱼苗；口服免疫对鱼体无损伤，操作方便，不受时间、地点、鱼体大小的限制，也是容易实施的免疫途径。

目前国产尚无上市的鱼用浸泡和口服疫苗，已有报道多停留在研发阶段。浸泡免疫在生产中，免疫效果受到多种因素影响，效果不佳；口服疫苗受胃肠道环境(pH太低、各种消化酶以及内容物)影响，疫苗抗原很难到达黏膜诱导位点而引起有效的免疫反应。而国外关于无乳链球菌感染罗非鱼时，先通过粘附作用定植于罗非鱼体表或腔道的粘液，且最主要感染途径为胃肠道的研究报道，为其浸泡和口服疫苗的开发可行性奠定了理论基础。因此改善鱼类疫苗浸泡方式，研制新型口服疫苗的制备及免疫方法，是水产养殖健康、快速发展中亟待解决的问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可方便快捷的应用于鱼苗免疫的新型的浸泡免疫和口服疫苗制备及免疫方法，以及最佳的免疫操作规程，联合应用这两种免疫方法能够显著提高疫苗抗原进入机体的量，从而提高疫苗的免疫效果。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种鱼类免疫方法，包括：

浸泡免疫步骤：先利用鱼体表面处理液清洗鱼苗体表，然后用疫苗浸泡液浸泡免疫鱼苗；

每1L表面处理液中含有0.05-2mL 38-40wt％的甲醛溶液，0.001-0.0035g苯扎氯胺，0.04-0.08g乙醇酸和10-20mL甘油；

每1L疫苗浸泡液中含有50-200mL 0.01-0.1％的卡波姆，1-5mL的三乙醇胺， 10-20mL的甘油和1×10⁶-1×10⁸CFU/mL的疫苗抗原；

口服免疫步骤：浸泡免疫后的鱼苗隔12-48h后饲喂口服疫苗饲料；

每1kg口服疫苗饲料包括40-100g的口服疫苗佐剂，口服疫苗佐剂由以下按重量份计的以下组分组成：3-6份抗胃酸组分、2-5份胃消化酶抑制组分、2-5份促肠道吸收组分和2-6份多糖包裹组分；所述抗胃酸组分用于将疫苗在胃肠道局部的pH值调节为6.5-7.5；所述促肠道吸收组分用于协助运载疫苗扩散到黏膜细胞，包括表面活性剂、油酸类或增稠剂；所述多糖包裹组分为非蛋白类多糖。

进一步地，浸泡免疫步骤中，包括以下三个过程：

1)首次浸泡：利用鱼体表面处理液浸泡鱼苗1-3min；

2)洗涤：转移至清水桶中洗涤1-2min；