[发明专利]一种抗ROR1安全型嵌合抗原受体修饰的免疫细胞及其应用

说明书

本发明公开了一种抗ROR1安全型嵌合抗原受体修饰的免疫细胞及其应用，免疫细胞经抗ROR1安全型嵌合受体修饰得到抗ROR1安全型嵌合抗原受体修饰的免疫细胞，所述抗ROR1安全型嵌合抗原受体包括，CD8 leader、ROR1结合区、CD8的铰链区，跨膜‑刺激结构域、CD3ζ刺激信号传导区和安全开关元件，该发明有效防止转导细胞引起不良反应，极大的提高CAR技术的临床有效性及安全性。

技术领域

本发明涉及生物基因领域，更具体的说，是一种抗ROR1安全型嵌合抗原受体修饰的免疫细胞及其应用。

背景技术

受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(receptor tyrosine kinase-like orphanreceptor–1，ROR1)是近年来发现的肿瘤相关性胚胎抗原，属于ROR亚族的细胞表面受体。在胚胎形成期高表达，但是在正常的成熟组织中不表达，除了在不成熟的B细胞前体亚组和脂肪细胞上低表达以外。目前研究也发现ROR1在多种B细胞恶性肿瘤上和多种实体瘤中如乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌、肾癌中呈高表达，并与肿瘤的发展和预后密切相关。因此，ROR1是恶性肿瘤靶向治疗的理想分子靶点。

恶性肿瘤是临床上常见的多发病，其发病率及其死亡率呈逐年上升趋势，已经成为影响全人类生命与健康的问题之一。目前治疗方法除了放疗、化疗、手术外，过继性免疫治疗尤其是嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)修饰的T细胞免疫治疗(CAR-T)也逐渐在肿瘤治疗中得到应用。CAR-T是一种结合T细胞免疫治疗和抗体靶向治疗的治疗手段，具有特异性识别并杀伤肿瘤细胞的能力，其突出优点是可以克服MHC限制性。目前在临床应用的案例已取得令人振奋的结果，有完全治愈急性或慢性淋巴细胞白血病的报道。然而，CAR-T细胞在治疗实体肿瘤时，由于潜在的脱靶毒性，使其安全性成为了其在实体瘤治疗应用上的关键问题(国际上第一例CAR-T治疗死亡的案例就是为HER2阳性患者治疗时，引起正常肺组织表达的HER2受到CAR-T细胞攻击导致)。针对这个问题，研究发现，当出现上述副作用或者想去除基因修饰的细胞时，诱导这些细胞凋亡起着必要的作用。

发明内容

为了弥补以上不足，为提高CAR-T治疗的“可控性”和“安全性”本发明提供了一种抗ROR1安全型嵌合抗原受体修饰的免疫细胞及其应用。

本发明的方案是：

一种抗ROR1安全型嵌合抗原受体修饰的免疫细胞，免疫细胞经抗ROR1安全型嵌合受体修饰得到抗ROR1安全型嵌合抗原受体修饰的免疫细胞，所述抗ROR1安全型嵌合抗原受体包括，CD8leader、ROR1结合区、CD8的铰链区，跨膜-刺激结构域、CD3ζ刺激信号传导区和安全开关元件。

作为优选的技术方案，所述安全开关元件位于所述抗ROR1安全型嵌合抗原受体的N端或者C端。

作为优选的技术方案，所述跨膜-刺激结构域选自CD8、CD27、CD28、CD137/4-1BB、CD134/OX40、ICOS分子的全部或部分片段。

作为优选的技术方案，所述安全开关元件为FK506结合蛋白12-二聚化化学诱导子系统(FK506binding protein 12-chemical inducers of dimerizations，FKBP12-CID)诱导的caspase9自杀基因安全开关，所述FK506结合蛋白12-二聚化化学诱导子系统包括人工构建的融合基因以及化学诱导物两部分，所述caspase9自杀基因融合于F36V-FKBP(FKBP12的突变体36位上的Phe被Val替代)，在同型二聚体AP1903的作用下使F36V-FKBP发生二聚化，进而引起所述caspase9自杀基因的二聚化激活相关的调亡信号途径，诱导靶细胞的快速死亡。

作为优选的技术方案，本发明抗ROR1安全型嵌合抗原受体修饰的免疫细胞选自自体的或转基因的T细胞、NK细胞、细胞毒性T淋巴细胞或调节T细胞，记忆性T细胞、双特异性T细胞、CIK细胞。