[发明专利]一种磷脂IgM抗体的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法在审

专利信息
申请号: 201710829906.8 申请日: 2017-09-15
公开(公告)号: CN107402306A 公开(公告)日: 2017-11-28
发明(设计)人: 李庆春;徐顺澍;李永红;吴荣桂;周斌;万文琴 申请(专利权)人: 江苏浩欧博生物医药股份有限公司
主分类号: G01N33/577 分类号: G01N33/577
代理公司: 苏州创元专利商标事务所有限公司32103 代理人: 汪青,周敏
地址: 215123 江苏省苏州市*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 磷脂 igm 抗体 化学 发光 定量 检测 试剂盒 及其 制备 方法
【说明书】:

技术领域

发明属于医疗器械体外诊断试剂化学发光免疫分析领域,特别是涉及一种磷脂IgM抗体的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

人体内的磷脂主要包括带负电荷的心磷脂(Cardiolipin,CL)、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PI)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PS),带中性电荷的磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)等。抗磷脂抗体(Anti-phospholipids,APL)是一族针对自身抗原包括磷脂或带负电荷磷脂与载体蛋白复合物的病理性抗体。抗磷脂抗体综合症 (antiphospholipidsyndrome,APS),是一组与抗磷脂抗体有关的自身免疫性疾病。典型的临床表现有动脉静脉血栓、血小板减少以及习惯性流产等,多见于年轻人,60%-80%为女性患者,女性中位年龄为30岁。APS可分为原发性APS和继发性APS,继发性APS多见于系统性红斑狼疮(SLE)或类风湿关节炎(RA)等自身免疫病。此外,还有一种少见的恶性APS(catastrophic APS),表现为短期内进行性广泛血栓形成,造成多器官功能衰竭甚至死亡。 APS患者血中检出APL(IgG型和/或IgM型)是确立APS诊断的必要条件。

放射免疫分析(RIA)的高放射性、有效期短、给操作者带来的健康隐患及对环境的污染,普通微孔板酶联免疫分析(EIA)精密度差、灵敏度差、无法实现定量检测,也不容易实现全自动化。传统的ELISA灵敏度较低。

传统的抗磷脂抗体综合征检测项目为心磷脂抗体,其存在灵敏度低的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种灵敏度高的磷脂IgM抗体的化学发光定量检测试剂盒。

本发明所要解决的另一技术问题是提供上述试剂盒的制备方法。

本发明所要解决的再一技术问题是提供采用上述试剂盒进行检测的检测方法。

为解决以上技术问题,本发明采取如下技术方案:

本发明的一个目的是一种磷脂IgM抗体的化学发光定量检测试剂盒,包括如下试剂:

含有5~100ng/mL的生物素标记的心磷脂抗原、5~100ng/mL的生物素标记的磷脂酰乙醇胺抗原、5~100ng/mL的生物素标记的磷脂酰肌醇抗原、 5~100ng/mL的生物素标记的磷脂酰丝氨酸抗原的混合溶液;

浓度为10~1000ng/mL的碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgM单克隆抗体溶液;

浓度为0.1~1mg/mL的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液。

优选地,所述的混合溶液中所述的生物素标记的心磷脂抗原的浓度为 10~20ng/mL。

优选地,所述的混合溶液中所述的生物素标记的磷脂酰乙醇胺抗原的浓度为10~20ng/mL。

优选地,所述的混合溶液中所述的生物素标记的磷脂酰肌醇抗原的浓度为10~20ng/mL。

优选地,所述的混合溶液中所述的生物素标记的磷脂酰丝氨酸抗原的浓度为10~20ng/mL。

优选地,所述的碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgM单克隆抗体溶液的浓度为 90~110ng/mL。优选地,所述的心磷脂抗原、所述的磷脂酰乙醇胺抗原、所述的磷脂酰肌醇抗原、所述的磷脂酰丝氨酸抗原分别经过氨基修饰。

优选地,所述的生物素为N-羟基琥珀酰亚胺。

优选地,所述的心磷脂抗原与所述的生物素的投料摩尔比为1:10~100;所述的磷脂酰乙醇胺抗原与所述的生物素的投料摩尔比为1:10~100;所述的磷脂酰肌醇抗原与所述的生物素的投料摩尔比为1:10~100;所述的磷脂酰丝氨酸抗原与所述的生物素的投料摩尔比为1:10~100;所述的碱性磷酸酶与所述的鼠抗人IgM单克隆抗体的投料质量比为1~10:1;所述的纳米磁微粒的羧基含量不低于0.4mmol/g。

进一步优选地,所述的心磷脂抗原与所述的生物素的投料摩尔比为1: 18~22;所述的磷脂酰乙醇胺抗原与所述的生物素的投料摩尔比为1:18~22;所述的磷脂酰肌醇抗原与所述的生物素的投料摩尔比为1:18~22;所述的磷脂酰丝氨酸抗原与所述的生物素的投料摩尔比为1:18~22;所述的碱性磷酸酶与所述的鼠抗人IgM单克隆抗体的投料质量比为1~2:1。

优选地,所述的试剂盒还包括两个或两个以上不同浓度水平的抗磷脂 IgM抗体溶液的质控品、两个或两个以上不同浓度水平的抗磷脂IgM抗体溶液的校准品、标准曲线、样本稀释液和化学发光底物。

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