[发明专利]使用兔皮提取物促进细胞增殖的方法

权利要求书

1.一种体外培养细胞或体外促进细胞增殖的方法，所述细胞选自少突胶质细胞、骨髓间充质干细胞和神经干细胞，所述方法包括使用兔皮提取物的步骤，其中所述兔皮提取物为接种了痘苗病毒的兔的发痘的皮肤的提取物；

所述兔皮提取物通过包括以下步骤的制备方法获得：

(A)提供来自接种了痘苗病毒的兔的发痘的皮肤；

(B)将所述皮肤与水混合，并搅拌2-10小时，得到混合物；

随后，将所述混合物的pH调整到9.5-10.5，并继续搅拌10-20小时；

(C)对步骤(B)的产物进行固液分离，从而获得第一提取液；和

(D)利用所述第一提取液来制备所述兔皮提取物；

其中，所述步骤(D)包括以下步骤：

(D1)将所述第一提取液的pH调整到4.0-5.0，并进行加热处理，随后，进行固液分离，从而获得第二提取液；

(D2)将所述第二提取液的pH调整到9.0-10.0，并进行加热处理，然后，进行固液分离，从而获得第三提取液；

(D3)将所述第三提取液的pH调整到3.5-5.5，并与吸附剂接触，使第三提取液中的活性物质吸附于吸附剂上；

(D4)对步骤(D3)的产物进行固液分离，收集吸附剂；和

(D5)用pH为9.0-11.0的提取溶剂提取吸附剂上所吸附的活性物质，从而获得第四提取液，即为兔皮提取物。

2.权利要求1的方法，所述体外培养细胞或体外促进细胞增殖的方法包括，在含有所述兔皮提取物的细胞培养基中培养所述细胞的步骤。

3.权利要求2的方法，其中，所述细胞培养基具有以下特征中的一个或多个：

(1)所述兔皮提取物以0.2-3NU/ml的水平存在于所述细胞培养基中；

(2)所述细胞培养基还包含有额外的试剂；

(3)所述细胞培养基为包含兔皮提取物的DMEM培养基、F12培养基或DMEM/F12培养基。

4.权利要求1-3任一项的方法，所述细胞为骨髓间充质干细胞。

5.兔皮提取物用于体外培养细胞或用于体外促进细胞增殖的用途，其中所述兔皮提取物为接种了痘苗病毒的兔的发痘的皮肤的提取物；所述细胞选自少突胶质细胞、骨髓间充质干细胞和神经干细胞；

所述兔皮提取物通过包括以下步骤的制备方法获得：

(A)提供来自接种了痘苗病毒的兔的发痘的皮肤；

(B)将所述皮肤与水混合，并搅拌2-10小时，得到混合物；

随后，将所述混合物的pH调整到9.5-10.5，并继续搅拌10-20小时；

(C)对步骤(B)的产物进行固液分离，从而获得第一提取液；和

(D)利用所述第一提取液来制备所述兔皮提取物；

其中，所述步骤(D)包括以下步骤：

(D1)将所述第一提取液的pH调整到4.0-5.0，并进行加热处理，随后，进行固液分离，从而获得第二提取液；

(D2)将所述第二提取液的pH调整到9.0-10.0，并进行加热处理，然后，进行固液分离，从而获得第三提取液；

(D3)将所述第三提取液的pH调整到3.5-5.5，并与吸附剂接触，使第三提取液中的活性物质吸附于吸附剂上；

(D4)对步骤(D3)的产物进行固液分离，收集吸附剂；和

(D5)用pH为9.0-11.0的提取溶剂提取吸附剂上所吸附的活性物质，从而获得第四提取液，即为兔皮提取物。

6.权利要求5的用途，所述体外培养细胞或体外促进细胞增殖包括：将所述兔皮提取物添加到细胞培养基中，然后用于体外培养细胞或用于体外促进细胞增殖。

7.权利要求6的用途，所述细胞培养基具有以下特征中的一个或多个：

(1)所述兔皮提取物以0.2-3NU/ml的水平存在于所述细胞培养基中；

(2)所述细胞培养基还包含有额外的试剂；

(3)所述细胞培养基为包含兔皮提取物的DMEM培养基、F12培养基或DMEM/F12培养基。