[发明专利]一种含复合免疫佐剂的脂质体制剂

说明书

本发明属药物制剂领域，涉及一种含复合免疫佐剂的脂质体制剂为集多种免疫佐剂分子于一体的脂质体制剂。该制剂以脂质体作为免疫佐剂的载体，脂质体内部包载核酸纳米粒佐剂，脂质体的磷脂双分子层载有脂溶性小分子佐剂，脂质体的表面与鞭毛蛋白佐剂共价连接；以该脂质体制剂为佐剂进行抗肿瘤免疫，能提高刺激天然免疫应答的能力，增强抗原诱导产生特异性免疫反应，更有效地提高机体对肿瘤细胞的免疫杀伤能力和免疫预防能力以及降低对机体的毒副作用。

技术领域

本发明属药物制剂领域，涉及一种含复合免疫佐剂的脂质体制剂，具体涉及一种集多种免疫佐剂分子于一体的脂质体制剂。该制剂以脂质体作为免疫佐剂的载体，脂质体内部包载核酸纳米粒佐剂，脂质体的磷脂双分子层载有脂溶性小分子佐剂，脂质体的表面与鞭毛蛋白佐剂共价连接。该脂质体制剂可为佐剂进行抗肿瘤免疫，能有效提高机体对肿瘤细胞的免疫杀伤能力和免疫预防能力，降低对机体的毒副作用。

背景技术

据报道，十九世纪末，美国外科医生威廉·科利便发现部分患有恶性肉瘤的病人在同时感染丹毒后会出现肿瘤消退的现象，随后用活的丹毒致病菌链球菌和灭活过的链球菌及灵杆菌对肿瘤病人进行多次注射，发现伴随着严重的高烧、寒颤等细菌感染症状，部分病人的肿瘤出现萎缩，这一探索开启了利用细菌进行肿瘤治疗的先河。通常业内认为细菌治疗的作用原理在于接种的细菌或代谢产物在机体内引起强烈的急性炎症反应，被充分活化的免疫系统在清除细菌的同时也对肿瘤细胞进行杀伤作用。随着肿瘤细胞死亡并暴露自身抗原，免疫系统产生针对肿瘤的特异性抗体和淋巴细胞，并习得对肿瘤抗原的记忆性，从而让机体获得了抗肿瘤的免疫保护。细菌在这一过程中主要是作为免疫刺激佐剂起到活化免疫系统的作用。然而这一治疗方法由于副反应作用严重，治疗结果可重现性差，并没有获得美国食品药品管理局的批准通过。

受此疗法原理的启发，有关研究人员在此基础上进一步发展利用细菌的免疫抗肿瘤疗法。一方面，选择原本或经过减毒改造后毒性较低的菌株进行感染，以期降低细菌佐剂的毒性，例如使用诺维氏梭状芽胞杆菌孢子接种至肿瘤部分，利用细菌的低毒性和厌氧性，使细菌集中在肿瘤深处的坏死低氧区，有效降低了细菌感染造成的风险，其中，最成功的应用当属卡介苗灌注法治疗非肌层浸润性膀胱癌，它已成为防止此类膀胱癌手术切除后复发的最佳手段；另一方面，为了杜绝潜在的感染风险，对细菌进行灭活处理或者用细菌的提取物，做成合适的制剂，例如将热灭活的结核杆菌加入到石蜡和羊毛脂中作为完全弗氏佐剂，能够与溶有抗原的水相等体积震荡混匀形成乳剂，在体内缓慢释放抗原和佐剂；弗氏佐剂已成为动物免疫中诱导体液免疫和细胞免疫的标准免疫佐剂。

研究表明，活细菌佐剂免疫效果较强，但细菌本身即便经过改造仍有一定活力，当接种到免疫力较弱的个体时，存在发生感染，其潜在的突变可能导致毒性的恢复等风险。灭活菌及其衍生物虽然没有感染的风险，但仍无法避免局部造成的过强毒性刺激，且本身免疫效果较弱，保护期短，通常需要多次加强免疫。与此同时，源于细菌及其代谢产物得到的佐剂，其组成成分并不明确，潜在的毒性风险难以掌控，批次间的质量可控性也较差。

为了克服传统细菌佐剂的不足，需要摆脱对细菌本身的依赖，开发出人工全合成的高效安全免疫佐剂。在对天然免疫的研究中，人们发现Toll样受体(TLR)家族以及NOD受体家族在免疫细胞(如抗原呈递细胞)检测外界病原入侵发挥重要作用，这些受体能够分别与来自病原体的不同组成成分相结合，并将这些危险信号传递至下游的核转录因子，促使免疫细胞活化反应；其对应的配体也被一一发现，其中TLR4对应的配体单磷酰脂质A和NOD2对应的配体米伐木肽来自于细菌的细胞壁，TLR5对应的配体鞭毛蛋白来自于细菌表面的鞭毛，TLR9对应的配体胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸序列来自于细菌的基因组，四者的化学结构明确，均能在体外合成，并已被证实具有一定的免疫刺激能力，能够作为佐剂协同促进抗原在体内的免疫原性。