[发明专利]一种过表达PCNP基因的药物的制备及用途

说明书

本发明提供了一种过表达PCNP基因的药物的制备及用途。该药物包括过表达PCNP基因的质粒以及过表达PCNP基因获得的PCNP蛋白。所述过表达PCNP基因的质粒的构建方法，其包括以下步骤：根据PCNP基因序列，设计引物，PCR扩增目的基因；对GV230载体中的限制性酶切位点Xho I和Kpn I进行酶切，形成线性化GV230载体；将目的基因与线性化GV230载体进行连接构建GV230‑PCNP载体，即为过表达PCNP基因的质粒。将过表达PCNP基因的药物用于人神经母细胞瘤中时，过表达人神经母细胞瘤中PCNP基因后，可促进细胞凋亡，抑制细胞生长；抑制细胞迁移；抑制人神经母细胞瘤的生长。

技术领域

本申请属于生物制药技术领域，具体涉及一种过表达PCNP基因的药物的制备及用途。

背景技术

神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)属胚胎性肿瘤，多位于大脑半球，是儿童最常见的颅外肿瘤，是婴幼儿最常见的肿瘤。有将近一半的神经母细胞瘤发生在2岁以内的婴幼儿。神经母细胞瘤约占6-10％的儿童肿瘤，15％的儿童肿瘤死亡率。

PCNP(PEST-containing nuclear protein)是一种新近发现的含有PEST序列的核蛋白，PCNP作为泛素连接酶NIRF(Np95/ICBP90-like RING figer protein)的底物首次于2004年由日本科学家侧面报道，PCNP和NIRF一起构成一种新的信号转导通路，与细胞周期的调控和细胞增殖有密切关系。PCNP主要存在细胞核内，这种新型的指环状蛋白是一种具有泛素化能力的蛋白连接酶，参与到蛋白降解的泛素化途径中。目前关于PCNP的相关报道较少，但关于PEST结构域的研究相对较多，PEST domin对于细胞周期和增殖具有调控作用，并且和染色体的稳定、肿瘤的发生以及免疫系统疾病有关。

另有实验表明，PCNP在多种肿瘤组织中的表达显著高于癌旁组织和正常对照组织。因而关于PCNP与肿瘤的相关性尚待进一步研究，而关于调节PCNP过表达在肿瘤治疗中的作用更是缺乏相关的研究报道。

发明内容

基于上述现有技术中的缺陷，本发明的目的在于提供一种过表达PCNP基因的药物的制备及用途，该药物用于人神经母细胞瘤中，能够促进细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的生长。

本发明的目的通过以下技术方案得以实现：

一方面，本发明提供一种过表达PCNP基因的质粒的构建方法，其包括以下步骤；

根据PCNP基因序列(NM_020357)，设计引物，PCR扩增目的基因；

对GV230载体中的限制性酶切位点Xho I和Kpn I进行酶切，形成线性化GV230载体；

将目的基因与线性化GV230载体进行连接构建GV230-PCNP载体，即为过表达PCNP基因的质粒。

上述过表达PCNP基因的质粒的构建方法中，优选地，PCR扩增目的基因的引物序列为：

正向引物：

5’-TACCGGACTCAGATCTCGAGCGCCACCATGGCGGACGGGAAGGCGGGAGAC-3’(如SEQ IDNO：1所示)；

反向引物：

5’-GATCCCGGGCCCGCGGTACCGTATTGTCTTGGTCATGGACATTTC-3’(如SEQ ID NO：2所示)。

上述过表达PCNP基因的质粒的构建方法中，优选地，所述GV230载体的载体顺序为CMV-MCS-EGFP-SV40-Neomycin。

上述过表达PCNP基因的质粒的构建方法中，优选地，对构建的GV230-PCNP载体还包括对PCNP基因进行正确性鉴定，其步骤如下：