[发明专利]一种酶交联水凝胶的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种酶交联水凝胶的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：将CS-C分别溶于0.06wt％的H₂O₂溶液及0.004wt％的HRP酶溶液中，得到1.5-1.8wt％的CS-C的H₂O₂溶液和CS-C的HRP酶溶液；分别将所述CS-C的H₂O₂溶液和CS-C的HRP酶溶液加入到Y型注射器中进行混合注射，在凝胶模具中形成凝胶。

2.根据权利要求1所述的酶交联水凝胶的制备方法，其特征在于：所述凝胶模具为底部锯掉的EP管，形成凝胶的时间为150s。

3.根据权利要求1所述的酶交联水凝胶的制备方法，其特征在于：所述CS-C的制备方法包括：

1)将CS溶解于酸液中，搅拌得到CS溶液；调节所述CS溶液至pH＝5.0后，再将CHA加入到所述CS溶液中，CHA和CS的摩尔比为0.8～1，搅拌至澄清，得到溶液A；

2)将EDC溶解于第一溶剂中，得到溶液，将所述溶液逐滴加入到溶液A中，搅拌，使其充分混合；EDC和CHA的摩尔比为1-2，偶联反应12-24h，并保持pH＝5，温度37℃；反应结束后，透析除去反应物质及副产物，冻干得到CS-C。

4.根据权利要求3所述的酶交联水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述酸液为pH＝1～2的HCl溶液，所述搅拌时间为4-6h。

5.根据权利要求3所述的酶交联水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述第一溶剂为乙醇。

6.根据权利要求3所述的酶交联水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，控制滴加的速率为以1滴/秒。

7.根据权利要求3所述的酶交联水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述透析包括：依次置于含有1wt％的NaCl、pH＝5.0的HCl溶液和去离子水中透析。

8.如权利要求1-7任一项所述方法制备的酶交联水凝胶的应用，其特征在于：所述水凝胶可负载人诱导多能干细胞。

9.根据权利要求8所述的酶交联水凝胶的应用，其特征在于：所述水凝胶负载人诱导多能干细胞的方法包括：将15-18mg的CS-C分别溶于1mL 0.06wt％的H₂O₂溶液及1mL 0.004wt％的HRP酶溶液中，得到CS-C的H₂O₂溶液和CS-C的HRP酶溶液；将所述CS-C的H₂O₂溶液和CS-C的HRP酶溶液预混，得到预混液；在预混液未完全凝胶之前，加入0.2～0.3mL iPSC、4×10⁶个/mL的细胞悬液到所述预混液中，轻柔混合均匀后，在37℃，5％CO₂培养箱中培养3天。