[发明专利]猪δ冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备与应用

说明书

本发明属于动物免疫分析技术领域。具体涉及猪δ冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备与应用。本发明筛选的分泌针对猪δ冠状病毒N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A11，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：C2017107。本发明制备的单克隆抗体1A11具有良好的稳定性和特异性，可将其作为一抗用于PDCoV感染仔猪肠道免疫组织化学检测分析中或其他试剂盒的开发中。

技术领域

本发明属于动物免疫分析技术领域。具体涉及一种猪δ冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备与应用。

背景技术

猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,简称PDCoV)是由香港学者在2012年于猪粪便样品中首次发现的一种猪肠道致病冠状病毒。其属于尼多病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridea)δ冠状病毒属(Genus Deltacoronavirus)(Woo PC,etal.Discovery of seven novel Mammalian and avian coronaviruses in the genusdeltacoronavirus supports bat coronaviruses as the gene source ofalphacoronavirus and betacoronavirus and avian coronaviruses as the genesource of gammacoronavirus and deltacoronavirus.J Virol,2012,86(7):3995-4008；Woo PC,et al.Coronavirus genomics and bioinformatics analysis.Viruses,2010,2(8):1804-1820)。PDCoV在香港首次发现后并没有引起人们的关注，其对猪的致病性并没有确切的研究。在2014年，美国俄亥俄州部分猪场检测出PDCoV，随后PDCoV在美国至少18个州流行爆发，相关的病毒分离和动物致病性试验证实此病毒对仔猪具有较强的致病性，可以引起仔猪发生以腹泻为主的肠道疾病(Wang LY,et al.Detection and geneticcharacterization of deltacoronavirus in pigs,Ohio,USA,2014.Energ Infect Dis,2014,20(7):1227-1230；Ma YM,et al.Origin,evolution,and virulence of porcinedeltacoronaviruses in the United States.mBio,2015,6(2):e00064-15；Jung K,etal.Pathogenicity of 2porcine deltacoronavirus strains in gnotobioticpigs.Energ Infect Dis,2015,21(4):650-654)。鉴于PDCoV对养猪业的影响，美国农业部于2014年6月5日发布了一项联邦政令，专门设立了包括PEDV、PDCoV在内的致猪腹泻肠道病毒病例报告机制，并拨款2620万美元用于相关的检测防治工作(www.aasv.org)。在美国出现大规模的PDCoV爆发流行后，其他国家和地区如加拿大、韩国、泰国、越南、老挝等国也相继出现了PDCoV的流行(Lee JH,et al.Detection and phylogenetic analysis ofporcine Deltacoronavirus in Korean swine farms,2015.Transbound Emerg Dis,2016,63:248-252；Wang LY,et al.Porcine coronavirus HKU15detected in 9USstates,2014.Energ Infect Dis,2014,20(9):1594-1595；Homwong N,etal.Characterization and evolution of porcine deltacoronavirus in the UnitedStates.Prev Vet Med,2016,123:168-174；Janetanakit T,et al.Porcinedeltacoronavirus,Thailand,2015.Energ Infect Dis,2016,22(4):757-759；Lorsirigool A,et al.The first detection and full-length genome sequence ofporcine deltacoronavirus isolated in Lao PDR.Arch Virol,2016,161:2909-2911)。我国在2014年底也开始出现PDCoV流行的报道，其在猪腹泻样品中的阳性率约为15％，并呈现小范围的流行状况(Chen FZ,et al.Full-Length genome characterization ofChinese porcine deltacoronavirus strain CH/SXD1/2015.Genome Announcements,2015,3(5):e01284-15；Song D,et al.Newly emerged porcine deltacoronavirusassociated with diarrhoea in swine in China:identification,prevalence andfull-Length genome sequence analysis.Transbound Emerg Dis,2015,62:575-580；Dong Nan,et al.,Porcine deltacoronavirus in Mainland China.Energ Infect Dis,2015,21(12):2254-2255.)。