[发明专利]一种基于碳纳米角及TiO2介晶纳米材料的比率型电化学发光免疫传感器的制备方法

权利要求书

1.一种基于碳纳米角及TiO₂介晶纳米材料的比率型电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；

（2）滴加3μL 浓度为3 mg/ml 的碳纳米角（CNHs）悬浮液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得CNHs修饰玻碳电极；

（3）滴加3μL 浓度为0.2mmol/L的鲁米诺（luminol）、浓度为2mg/mL羧甲基壳聚糖（CMCS）及浓度为2mg/mL的六氟双酚A-硅酞菁（HFSPC）混合溶液于修饰电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得luminol@CMCS@HFSPC/CNHs修饰玻碳电极；

（4）将luminol@CMCS@HFSPC/CNHs修饰电极浸入浓度比为1:2的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）的混合液中50min，再浸入30 μL浓度为2 mg/mL辣根过氧化物酶（HRP）标记的前列腺特异性抗原抗体（Ab₁）溶液中并在4°C冰箱中孵育45min，用去离子水洗去物理吸附的Ab₁，制得HRP-Ab₁/luminol@CMCS@HFSPC/CNHs修饰玻碳电极；

（5）取60μL 浓度为1.0 wt.%的BSA 滴加到步骤（4）的修饰电极表面4°C冰箱中孵育1h，以封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，并保存在4°C冰箱中；

（6）将步骤（5）获得的修饰电极浸入不同浓度的前列腺特异性抗原（PSA）标准溶液中并在4°C冰箱中孵育1 h，用pH7.5的 PBS缓冲溶液冲洗电极表面，制得PSA/HRP-Ab₁/luminol@CMCS@HFSPC/CNHs修饰玻碳电极；

（7）将步骤（6）获得的修饰电极浸入50μL二萘嵌苯衍生物（PTC-NH₂）、八面体锐钛矿型TiO₂介晶（OAMs）和前列腺特异性抗原抗体（Ab₂）组成的复合物PTC-NH₂@OAMs@Ab₂溶液中并在4°C冰箱中孵育50 min，用pH7.5的 PBS缓冲溶液冲洗电极表面，制得PTC-NH₂@OAMs@ Ab₂/PSA/HRP-Ab₁/luminol@CMCS@HFSPC/CNHs修饰玻碳电极，并保存在4°C冰箱中。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的浓度为0.2mmol/L的鲁米诺（luminol）、浓度为2mg/mL羧甲基壳聚糖（CMCS）及浓度为2mg/mL的六氟双酚A-硅酞菁（HFSPC）混合溶液由下述方法制备的：将浓度为2mmol/L鲁米诺（luminol）, 浓度为 20mg/mL羧甲基壳聚糖（CMCS）及浓度为20mg/mL六氟双酚A-硅酞菁（HFSPC）的溶液简单混合并适当加入一定体积的水再均匀混合而制备成的。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的六氟双酚A-硅酞菁（HFSPC）由下述方法制备的：将0.20 g SiPcCl₂、0.24g六氟双酚A和0.14 g无水K₂CO₃置于30ml甲苯溶剂中在110ºC 下回流48小时，然后将反应混合物冷却至室温并将溶剂减压蒸发至干，随后将固体产物置于索氏提取器中用二氯甲烷纯化24小时，被提取的物质重结晶后用体积比为1：1的甲醇和去离子水的混合液淋洗，然后重新溶解于二氯甲烷中。