[发明专利]一种用于早期预示骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的miRNA组合物及试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于早期预示骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的miRNA组合物及试剂盒，该试剂盒含有hsa‑miR‑513a‑3p、hsa‑miR‑576‑3p、hsa‑miR‑551a和内参U6的特异性qRT‑PCR引物，还含有qRT‑PCR反应所需的酶和试剂。本发明提供的hsa‑miR‑513a‑3p、hsa‑miR‑576‑3p和hsa‑miR‑551a可以联合用于早期预示骨髓间充质干细胞成骨分化潜能，可以制备成用于早期预示骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的基因检测试剂盒，以用于骨髓间充质干细胞成骨分化诱导药物的筛选，可将筛选周期由现有技术的3‑7d缩短至12h，从而用于高通量筛选，提高筛选效率。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及一种用于早期预示骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的miRNA组合物及试剂盒。

背景技术

骨髓间充质干细胞取材方便、操作简单、增殖能力强，且具有干细胞的多向分化潜能，可被诱导成为间充质来源的多种成体细胞，使其成为基因治疗、细胞治疗、组织工程特别是骨组织工程理想的种子细胞。但由于骨髓间充质干细胞数量有限，约占骨髓有核细胞的十万分之一，且经过体外培养多次传代后，细胞的增殖与分化能力减弱。因此，有效提高骨髓间充质干细胞的成骨效率，同时获得充足的成骨种子细胞，对骨组织工程研究具有重要意义。

研究人员通过大量的筛选工作已经发现多种化合物都可以促进骨髓间充质干细胞成骨分化，比如黄芩苷(参考文献1：黄芩苷通过Wnt/β-catenin信号通路对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的促进作用，中国药理学通报2015年)、姜黄素(参考文献2：姜黄素调控大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化，中国组织工程研究第16卷第27期)、牡荆苷(参考文献3：牡荆苷对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响，中国现代应用药学2014年)、异补骨脂素(参考文献4：异补骨脂素对体外培养骨髓间充质干细胞增殖与成骨性分化的研究，中国中药杂志第36卷第15期)、小檗碱(参考文献5：小檗碱对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响，中国药理学通报2010年)等。更多的筛选工作还在持续开展中。

但是，目前的筛选效率较低，这是因为需要用药物对骨髓间充质干细胞干预7天左右(一般至少3天)才能较为可靠地判断该药物是否可以促进骨髓间充质干细胞成骨分化，时间周期较长，无法适应高通量高效筛选。因此，申请人为了提高筛选效率，必须寻找到可以早期预示骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的标志物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于早期预示骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的miRNA组合物及试剂盒，以用于早期预示骨髓间充质干细胞成骨分化潜能。

为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：

hsa-miR-513a-3p、hsa-miR-576-3p和hsa-miR-551a联合用于早期预示骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的用途。

一种用于早期预示骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的基因检测试剂盒，其中含有hsa-miR-513a-3p、hsa-miR-576-3p和hsa-miR-551a的特异性qRT-PCR引物。

优选地，hsa-miR-513a-3p的反转录引物序列如SEQ ID NO.3所示，qPCR上游引物序列如SEQ ID NO.4所示；hsa-miR-576-3p的反转录引物序列如SEQ ID NO.5所示，qPCR上游引物序列如SEQ ID NO.6所示；hsa-miR-551a的反转录引物序列如SEQ ID NO.7所示，qPCR上游引物序列如SEQ ID NO.8所示；各基因的通用qPCR下游引物序列如SEQ ID NO.9所示。

优选地，还含内参U6的特异性qRT-PCR引物。

优选地，内参U6的反转录引物序列如SEQ ID NO.1所示，qPCR上游引物序列如SEQID NO.2所示。

优选地，还含qRT-PCR反应所需的酶和试剂。