[发明专利]一种荧光原位杂交联合流式细胞术检测污水处理系统中聚磷菌的方法有效
| 申请号： | 201710810100.4 | 申请日： | 2017-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN107447023B | 公开（公告）日： | 2020-07-31 |
| 发明（设计）人： | 曾薇;李超;李宁;彭永臻 | 申请（专利权）人： | 北京工业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6816 | 分类号： | C12Q1/6816;C12Q1/04;G01N15/14 |
| 代理公司： | 北京思海天达知识产权代理有限公司 11203 | 代理人： | 刘萍 |
| 地址： | 100124 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 荧光 原位杂交 联合 细胞 检测 污水处理 系统 中聚磷菌 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种荧光原位杂交联合流式细胞术检测污水处理系统中聚磷菌的方法，其特征在于：通过对污水生物处理系统中的聚磷菌和全菌的检测，分析聚磷菌占全菌的百分含量，进行相对定量；取生活污水处理系统中活性污泥微生物，采用质量百分比为4％的多聚甲醛溶液固定细胞；超声分散固定好的细胞，采用乙醇溶液脱水处理；脱水后的细胞中加入含有PAOmix探针的杂交缓冲液，放入46℃恒温交箱中杂交2h；杂交后用杂交清洗液清洗，用SYBRGREEN I染料染色10min；染色好的细胞用10μm滤网过滤后进入流式细胞仪进行检测分析；
杂交缓冲液体系如下：
杂交清洗液体系如下：
上述杂交缓冲液与PAOmix探针按杂交缓冲液：探针PAOmix＝8:1的体积比混合得到含有PAOmix探针的杂交缓冲液；探针PAOmix由三种探针按PAO846:PAO651:PAO462＝1:1:1的等体积比混合，这三种探针均由染料Cy5标记；
上述流式细胞仪的检测步骤为：流式一通道荧光阈值设为FL1＝800，至少收集10000个颗粒；圈门SYBR GREEN I显阳性区域；圈门SYBR GREEN I阳性群中的细胞群；圈门Cy5标记的PAOmix显阳性的聚磷菌细胞群，得出聚磷菌在全菌中的数量百分比。
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