[发明专利]一种从山里红叶中转化和分离牡荆素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从植物中转化和分离活性成分的方法，具体涉及一种从山里红叶中转化和分离牡荆素的方法，属于药用植物开发领域。

背景技术

山里红(Crataegus pinnatifida Bge.var.Major N.E.Br.)为蔷薇科植物，是《中国药典》2010 版山楂项下一种重要的药材原植物，东北是山里红的主产地之一。山里红果实具有降血压、降血脂、抗肿瘤、抗菌等功效，在以往的研究中多进行药品食品开发研究。研究表明，山里红叶含有丰富的对健康有益的活性成分。目前，已经从山里红叶中发现了150多种化学成分，包括黄酮，三萜，类固醇，木酚素，有机酸，和含氮化合物等。其中黄酮类含量最多，其中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷，牡荆素-2″-O-鼠李糖苷，荭草苷，芦丁，牡荆素，金丝桃苷等均具有明显的抗氧化活性。这些活性成分具有良好的药用价值，可用于心血管、消化、内分泌系统等疾病的治疗。因此，山里红叶作为一种可再生资源，对其进行深入研究和开发具有重要意义。

最近有研究表明，牡荆素具有增加冠状动脉血流量，保护心脑血管系统等重要作用。山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷和牡荆素-2″-O-鼠李糖苷含量高于牡荆素，然而他们的药理活性却不及牡荆素，因此可以采用化学转化技术将其转化为牡荆素，为工业化生产牡荆素提供一个新的来源。

本发明旨在建立一种通过现代转化和分离技术，实现简单、快速、高效制备高纯度牡荆素。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以山里红干燥叶为原料，通过酸水解转化技术、大孔吸附树脂分离技术、重结晶技术获得高纯度牡荆素的工艺方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：将山里红叶经过3-7天自然风干或在30- 50℃下烘干24-36h，经粉碎后可通过60目筛网。取山里红干燥叶粉末加入0-75％的乙醇溶液，料液比为1:10-1:25，然后加入0-3M浓盐酸，在微波功率500-900W、微波转化温度60-75℃的条件下，微波转化时间20-50min，转化次数1-3次，收集转化产物，减压浓缩至干。再将山里红叶转化产物溶解于5-30％的甲醇或乙醇溶液中，经D101、AB-8、NKA-9、 HPD-600树脂吸附，固液比为1:10-1:20，吸附液流速1-5mL/min，然后以30-70％乙醇洗脱，洗脱液流速3-10mL/min，收集洗脱液中牡荆素含量大于60％的流份，减压浓缩，洗脱液中牡荆素含量小于60％的流份重新上柱，并重复此步过程，至浓缩物中牡荆素的含量大于60％。将得到的牡荆素含量大于60％的浓缩物中加入10-90％的甲醇或乙醇溶液，固液比为1:100-1:1000，4℃结晶，过滤，得到结晶，然后向结晶中加入10-90％的甲醇或乙醇溶液，固液比为1:100-1:1000，以80-100℃的温度水浴溶解，冷却至室温，析出结晶，得到纯度大于95％的牡荆素。

本发明的优点：

(1)本发明所利用的山里红叶是一种可再生资源，可以作为工业提取牡荆素的新原料；

(2)本发明实现了山里红资源的充分利用，最终产品得率高、纯度高，其中牡荆素得率大于 60％，纯度大于95％。

附图说明

附图1牡荆素结构图

附图2牡荆素-4″-O-葡萄糖苷结构图

附图3牡荆素-2″-O-鼠李糖苷结构图

附图4混合标准品的HPLC图(HPLC检测条件如下，色谱条件为：色谱柱为HiQ sil C₁₈柱(5 μm，250mm×4.6mm)，流动相为四氢呋喃:乙腈:水:磷酸＝175:31:794:0.325，流速为1.0mL/min，检测波长350nm，柱温30℃，进样量为10μL。)

附图5山里红叶微波辅助酸水解产物的HPLC图

附图6重结晶后牡荆素产品HPLC图

附图7鸡胚绒毛尿囊膜用于药物传递系统的体内实验图(A.鸡胚绒毛尿囊膜的垂直视图，B. 空白对照组，C.山里红叶微波辅助酸水解提取物组，D.山里红叶微波辅助法提取物组，E.阳性对照组，F.牡荆素产品用药组，G.牡荆素-4″-O-葡萄糖苷用药组，H.牡荆素-2″-O-鼠李糖苷用药组)

附图8鸡胚绒毛尿囊膜实验中血管数的统计结果(I，II，III代表不同尺寸的血管，I级血管直径100-300μm，II级血管直径50-100μm，III级血管直径小于50μm)

具体实施方案

实施例1：