[发明专利]一种c-Myc蛋白可结合DNA片段及在c-Myc活性检测中的应用

说明书

本发明涉及一种c‑Myc蛋白可结合的DNA片段，其包含一个或多个c‑Myc蛋白结合框，每个c‑Myc蛋白结合框的序列为5'‑SCACGTGS‑3'，S表示C或G；还涉及该DNA片段的应用；还涉及一种用于检测细胞内c‑Myc蛋白转录调控活性的方法。通过使用本发明的DNA片段和方法，可直接针对性地检测细胞内c‑Myc蛋白的转录调控活性，而非仅仅检测其转录本或蛋白质的含量，从而使得能够更准确地分析c‑Myc蛋白作为转录因子在一些疾病发展中所起的作用。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，更特别地，涉及一种c-Myc蛋白可结合的DNA片段及其在检测细胞内c-Myc转录调控活性中的应用。

背景技术

c-Myc是细胞周期相关转录因子Myc家族成员之一，能调控细胞凋亡、细胞周期进程、细胞代谢重编程。c-Myc基因定位于染色体8q24，主要通过扩增和染色体易位重排的方式激活，与肿瘤的发生、发展和演变转归密切相关。c-Myc基因在人类粒细胞性白血病、视网膜母细胞瘤、乳腺癌、肺癌、结肠癌、成骨肉瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、脂肪肉瘤、横纹肌肉瘤等肿瘤组织中扩增和过度表达，与肿瘤的早期复发有关。

c-Myc蛋白在结构上可分为转录激活区、非特异DNA结合区、核定位序列、碱性区、螺旋-环-螺旋(HLH)及亮氨酸拉链区。c-Myc蛋白HLH区紧随着碱性区，当该碱性区以特殊方式结合至DNA上时，可变成螺旋结构，c-Myc蛋白发挥转录因子作用。

目前检测c-Myc有多种方法，western blot或qPCR等方法虽然灵敏度高，但检测到的只是c-Myc蛋白含量的差异，不能体现出c-Myc结合其特异靶序列后活性的改变情况。

因此，需要一种简单可靠的检测内源性c-Myc转录调控活性的方法。

发明内容

发明人通过研究发现，c-Myc蛋白结合的DNA序列存在高度的保守性，其结合的DNA核心序列为5'-SCACGTGS-3'(S表示C或G)。

基于以上研究，本发明提供了一种c-Myc蛋白可结合的DNA片段，其包含一个或多个c-Myc蛋白结合框，每个所述c-Myc蛋白结合框的序列独立地为5'-SCACGTGS-3'，S表示C或G。

在一个优选实施方案中，当包含多个c-Myc蛋白结合框时，每两个相邻的c-Myc蛋白结合框之间具有间隔序列，并且每两个相邻的c-Myc蛋白结合框之间的所述间隔序列为AT。

在一个优选实施方案中，序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供了上述DNA片段在检测细胞内c-Myc转录调控活性中的应用。

本发明还提供了一种用于检测细胞内c-Myc转录调控活性的方法，其包括以下步骤：

S1：将包括上述DNA片段以及连接于所述DNA片段下游的报告基因表达框的报告基因系统导入所述细胞；

S2：通过检测所述报告基因的表达来计算所述细胞内c-Myc转录调控活性。

在一个优选实施方案中，所述报告基因系统为双荧光素酶报告基因系统，包括重组质粒和对照质粒，并且所述重组质粒带有所述DNA片段以及连接在所述DNA片段下游的荧光素酶I的表达框，所述对照质粒带有荧光素酶II的表达框，所示荧光素酶I与所述荧光素酶II不同。

在一个实施方案中，所述重组质粒通过将所述DNA片段插入至质粒pGL3-Basic的Kpn I与Hind III位点之间得到。

在一个实施方案中，所述对照质粒为phRL-TK。

在一个实施方案中，S1具体包括：

S11：将所述细胞培养至贴壁，并恢复形态；