[发明专利]一种抗CD147纳米抗体、其生产方法及应用

说明书

本发明涉及一种抗CD147蛋白的纳米抗体，同时还公开了编码该纳米抗体的基因序列以及表达该纳米抗体的宿主细胞。通过本发明所公布的纳米抗体基因序列及宿主细胞，该纳米抗体能够在大肠杆菌内高效表达，应用于多种癌症检测试剂的研发。

技术领域

本发明属于分子生物学和免疫学技术领域，具体涉及噬菌体展示抗体文库和纳米抗体重组表达技术，特别是涉及一种针对CD147蛋白分子的噬菌体纳米抗体库筛选，纳米抗体的结构、生产方法及应用。

背景技术

CD147是一种广泛表达于造血及非造血细胞系，分子量约43-66kDa的跨膜糖蛋白，基因定位于19p13.3，其编码区编码269个氨基酸残基，包括细胞外N端2个C2型免疫球蛋区、24个氨基酸残基组成的跨膜区和C端39个氨基酸残基的胞内区。CD147广泛表达以及与其他蛋白的相互作用使之能够参与多种不同的生理病理过程，并与某些重要疾病如肿瘤、炎症等的发生发展密切相关CD147在多种肿瘤细胞、组织高表达。功能研究发现，其通过诱导周围成纤维细胞及肿瘤细胞自身产生多种基质金属蛋白酶(MMPs，包括MMP-1,MMP-2,MMP-9)降解细胞外基质，促进肿瘤细胞的浸润和转移。CD147胞外区还含有3个Asn糖基化位点，表明CD147分子N端高度糖基化，提示CD147分子的N端高度糖基化，但糖基化的程度具有组织特异性，在不同组织不同种属中，由于蛋白分布同，其糖基化方式也有所不同，不同的糖基化方式又使得蛋白发挥不同的功能。同时，CD147分子糖基化的程度决定了其激活MMP的能力，纯化的去糖基化的CD147分子不能诱导MMP分泌。大量究结果表明，各种癌组织、细胞中，CD147分子普遍高表达，并伴随高度的糖基化。CD147分子的糖基化修饰非常丰富，糖链约占总分子量的一半。目前的研究表明，肿瘤细胞中CD147的糖基化修饰对其诱导基质金属蛋白酶的分泌可能有重要意义，从而影响肿瘤的发生发展。CD147是多种肿瘤表面的靶标分子，应用相关技术制备CD147的抗体，做成诊断试剂盒或抗体药物，从而用于癌症的诊断和治疗。

纳米抗体是在传统抗体的基础上，运用分子生物学技术研发得到的，其分子量约为15KD，是目前已知最小的可结合抗原的抗体分子。最初有比利时科学家Hamers.R在骆驼血液中发现，普通的抗体蛋白由两条重链和两条轻链组成，而从骆驼血液中发现的新型抗体只有两条重链，没有轻链，这些新型抗体能像正常抗体一样于抗原紧密结合，但不像单链抗体那样相互粘连聚集成块。与传统抗体相比，纳米抗体具有相对分子质量小、亲和力高、稳定性高、溶解性好、免疫原性低、穿透力强、人源化简单等优势。因此，因此应用纳米抗体技术研发CD147。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种抗CD147抗体、其编码序列、制备方法、以及应用。具体而言，

一方面，本发明提供一种抗CD147抗体，其含有由SEQ ID NO:3所示的CDR1、由SEQID NO:4示的CDR2、以及由SEQ ID NO:5所示的CDR3。

本发明所述抗CD147抗体，其是单克隆抗体、Fab、F(ab)2、Fv、scFv、单域抗体、纳米抗体等。

本发明所述抗CD147抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明所述抗CD147抗体，其进一步带有标记，所述标记包括酶标记(如辣根过氧化物酶标记、碱性磷酸酶标记)、光学标记(化学发光标记)、荧光标记、同位素标记等。

第二方面，本发明提供一种基因，其编码本发明所述抗体。

本发明所述基因，其含有SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。

本发明所述基因可以是DNA、cDNA、mRNA，除了编码序列以外，还包括非编码区序列，例如5’UTR和3’UTR等。

第三方面，本发明提供一种核酸构建体，所述核酸构建体包含本发明所述的基因。