[发明专利]高亲和结合免疫球蛋白G的短肽及应用

说明书

一种高亲和结合免疫球蛋白G的短肽及应用，所述短肽(a)由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的短肽，并且通过两端的半胱氨酸巯基形成二硫键构成环状结构；(b)在(a)限定的氨基酸序列中经过缺失、插入或置换一个或几个氨基酸且与(a)具有相同生物学功能的由(a)衍生的短肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，并且通过两端的半胱氨酸巯基形成二硫键构成环状结构。本发明还包括高亲和结合免疫球蛋白G的短肽及应用。本发明筛选的短肽与免疫球蛋白G高度亲和，经过体外亲和能力动力学测定，该短肽结合IgG的结合常数KD可达到7.02E‑06M。

技术领域

本发明涉及一种短肽及应用，具体涉及一种高亲和结合IgG的短肽及应用。

背景技术

免疫球蛋白G(IgG)，即抗体，是在脾脏和淋巴结中合成，在人体血清中的含量最高，占血清总Ig的75％～80％，而且在血清中半衰期长，主要分布在血清和组织液中，是抗细菌、抗毒素和抗病毒抗体的主要组成部分，也是机体抗感染免疫的过程中的重要物质基础。IgG分子的基本结构是由四肽链组成的，即2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)，各个链之间以二硫键相连，从而使整个分子具有一定的灵活性。IgG分子可分为恒定区和可变区两部分，分子中没有轻链的部分称为可变区或Fc段(可结晶部分)，此区域是由一组固定的基因所决定，同一个种属中的所有同亚型抗体此区域是一致的；分子中既有重链又有轻链的部分称为恒定区或Fab段(抗原结合区)，此区域的极端包含识别并结合靶抗原表位的高可变位点，Fab段也是由一组固定的基因决定，但需要进一步的体细胞突变产生独特的和高特异的可变位点。

抗体可以结合一个特定结构域(表位区域)的蛋白质与多结构域，从而阻止一部分复合物只有一种蛋白质的功能。可见，抗体因其具有高度的结合特异性靶抗原，是免疫检测的关键因素，已成为检测或调控蛋白质功能的关键工具，可用于疾病诊断或实验室检测生物分子。此外，由于抗体对细胞膜的不渗透性，使用治疗性抗体可通过阻断蛋白质的功能来治愈疾病疾病，而抗体偶联药物(ADC)会显著增强这种渗透治疗效果。但是，在大多数情况下，ADC药物是通过适当的化学接头对共价连接抗体，由于化学连接一般不能很好的定点连接，可能会损害抗体内在功能或结构完整性的交联化学反应，至今仍然存储着没法克服的缺陷。

近年来，为了将抗体输送到活细胞中，已开发许多相关技术，其中具有代表性的方法包括将抗体蛋白结合在脂质体的表面，可具有靶向性，然而由于脂质体存在靶向性不够明显，包封率和稳定性差，载药量相对较低，制备工艺复杂等缺点，特别是脂质体毒性较大，在活体研究中发现其会在肺部聚集并造成炎症，并且与DNA包裹形成的颗粒粒径较大(500nm)，不利于进入肿瘤组织发挥作用。因此，限制了脂质体的广泛应用。现已研究证明IgG结合肽(FcBP)由于具有可逆和位点特异性的结合抗体部位，可用于抗体-药物偶联。通过将药物连接在短肽上，然后利用短肽定点到抗体上，就可以实现抗体药物的稳定合成，从而为药物在活体内的靶向性提供了非常方便的功能链接工具，而且短肽在生物组织中的穿透性更佳，毒性较低，合成上也更为容易并具有较低的免疫原性。但是，直链短肽虽然在体外具有很好的生物活性和稳定性，但是进入体内后因体内环境复杂，存在各种各样的酶，导致直链短肽在酶的作用下很快降解，活性丧失；另外，直链肽在液相里的构象柔性使得不大容易符合受体的构象要求，这些不利因素造成直链短肽仍有许多问题有待解决。因此，由于线性小肽的亲和力和特异性仍不能满足临床应用的需求，迫切需要获得更高亲和力和特异性的多肽分子。