[发明专利]一种快速区分鲍耐温性能的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及水产生物耐温性能测定，尤其是涉及一种快速区分鲍耐温性能的测定方法。

背景技术

自古以来，鲍一直都是中国的名贵食材，位居海产八珍之首。我国于上世纪80年代末即开始了鲍的大规模养殖，截至2013年底，其年产量超过10万吨，直接经济产值已超百亿。皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)原是我国北方海区的主要养殖品种，近年来，随着新品种“大连一号”的成功培育以及养殖技术的突破更新，其养殖范围不断南扩，现在福建已是国内最大的皱纹盘鲍养殖区，其年产量可达全国产量的80％。尽管在南方驯化多年，但皱纹盘鲍的耐高温能力依旧不强，夏季大量死亡的事件频发，且随着全球变暖以及养殖环境的不断恶化，这一情况将愈发严峻。因而，培育鲍的耐高温新品种(系)显得尤为重要，而其中建立鲍的耐高温性状的准确测评方法是品种培育的关键。

传统的鲍耐温性状的研究多是基于夏季的养殖数据或是以半致死温度等方法为代表的实验室内评测方法，前者实验周期长，且自然海区中水文条件复杂，实验易受其他因素影响，无法提供准确的数据，而以半致死温度等方法为代表的实验室内测评方法，通常在短时间内改变水温，以鲍的存活率为指标来完成测评工作，但这一方法对鲍的损伤极大，评测结束后，耐受性强的个体往往也无法存活，造成实验用鲍的死亡。因此，如何于实验室中快速准确地评测鲍的耐温性能，成为鲍育种工作者亟需解决的问题之一。

1889年，Svante Arrhenius提出了一个Arrhenius方程，用于阐述化学反应速率常数与温度变化之间的关系。在一定温度范围内，变温动物的代谢水平与温度之间呈正相关，因而Arrhenius方程也适用于描述某些生理反应与温度之间的关系。例如，Stillman等(Stillman JH,1996)利用测定的心率、耗氧量与温度之间的关系，计算了porcelain crabs的ABT(Arrhenius break temperatures)；Dong等(Dong and Williams,2011)通过测定心率与温度间的关系，比较了两种不同嫁女戚间ABT的差异，并为Prusina引用(Prusina et al.,2014)，作为评价生物对温度耐受性的标准之一。

基于心率的评测方法有诸多优点，如实验条件可控、周期短、经济性好、对个体无损伤，因而，如能基于此项技术开发鲍耐温性能的测评方法，将能为鲍耐温新品种(系)的培育提供巨大的便利。

发明内容

本发明的目的是提供具有测评周期短，操作方便，经济性好，且不会对实验用鲍鱼造成损伤，可在实验室内完成相应的测评工作等优点的一种快速区分鲍耐温性能的测定方法。

本发明包括以下步骤：

1)将待测鲍鱼样品暂养于循环水系统中，投喂新鲜江蓠或海带，及时清理残饵与粪便，喂养；

2)将待测鲍鱼样品，清除其贝壳上的附着物，将鲍鱼贝壳干燥；

3)鲍的心率测定采用非入侵式的方法，利用红外传感器探寻鲍心脏的准确位置，使信号强度不低于1V，确定位置后利用胶水将红外传感器固定于鲍壳上；

4)将固定好红外传感器的鲍放回洁净海水中进行恢复，用于补充鲍在操作过程中流失的水分，而后利用水浴，以固定速率进行升温处理，直至鲍心率显著下降，停止升温，将鲍转移至正常海水中，测定过程中，实时记录鲍心率的变化及相应的温度；

5)将获得的心率与温度数据进行处理，而后以温度为横轴、心率为纵轴绘制Arrhenius曲线，在Arrhenius曲线的拐点前后分别对两段曲线进行线性回归，获得相应的回归方程，联立两个方程，交点的横坐标即为鲍的心率ABT值；

6)在每个受测群体中，随机选取不少于20个健康个体用于测定，取平均值用于表征每个群体的热耐受性。

在步骤1)中，所述循环水系统中的温度可为16～25℃，盐度可为30‰～35‰，浓度不低于6mg/L；喂养时间可为5～15天，以保证待测鲍鱼样品处于正常的状态。

在步骤2)中，所述干燥可采用吸水纸将鲍鱼贝壳充分干燥。

在步骤4)中，所述海水的温度可为16～24℃，所述放回洁净海水中进行恢复的时间可不少于10min，所述升温处理的速率可为1℃/(5～30)min，升温处理的程序可在鲍的心率低于20～40次/min时停止，以保证受测样品可在评测结束后存活；所获得的心率数据与温度数据都应进行相应的处理转化，以满足Arrhenius方程的需求。

本发明具有以下优点：