[发明专利]一种生物活性纳米医用胶原的制备方法和用途

说明书

本发明提供一种生物活性纳米医用胶原的制备方法和用途：取富含胶原的动物组织，经脱脂以及洗涤后，得到胶原提取的原料；将胶原提取的原料依次经过浸泡、酶解、离心、盐析、复溶、透析、冻干，低温球磨≥24h，得到纳米胶原。本发明制备的胶原纯度高、活性得到有效保留，且杂质少。本发明制备的纳米胶原在医药等领域具有广泛的应用价值。

技术领域

本发明属于医学生物材料领域，具体涉及一种纳米尺度胶原的制备。

背景技术

目前具有医用生物活性的纳米级胶原的产品很少见到报道，且目前采用酶解加超滤的方法获得纳米级胶原蛋白，不仅工艺复杂，而且通常采用的酶解温度较高，造成胶原医用生物活性大大降低，超滤法的使用导致其纳米胶原产率较低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生物活性纳米医用胶原的制备方法和用途。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种生物活性纳米医用胶原的制备方法，该纳米医用胶原由提取的天然胶原经球磨而制成，包括以下步骤：

1)取富含胶原的动物组织，经脱脂以及洗涤后，得到胶原提取的原料；

2)将胶原提取的原料依次经过浸泡、酶解、离心、盐析、复溶、透析、冻干，得到(海绵状)胶原；

3)将步骤2)得到的(海绵状)胶原低温球磨≥24h，得到纳米胶原。

所述步骤1)具体包括以下步骤：

1.1)预处理：取新鲜的动物跟腱、动物皮或动物关节软骨，洗净后去除脂肪、真皮层、筋膜、皮毛，得到富含胶原的动物组织；

1.2)脱脂：将富含胶原的动物组织依次经切细、双蒸水洗涤、绞碎后置于氯仿-甲醇混合溶剂中浸泡脱脂，浸泡时间为3～6h；

1.3)洗涤：将脱脂的富含胶原的动物组织于NaCl和NaHCO₃混合水溶液中浸泡，NaCl质量分数为2％～30％，NaHCO₃质量分数为1％～10％，浸泡时间为3～8h；然后依次经双蒸水洗涤、离心后过300～800目筛，筛余物即为胶原提取的原料。

所述酶解的条件为：胃蛋白酶:胶原提取的原料的质量比为0.1～5:10～80，酶解消化温度为2～4℃，酶解消化时间为1～7天。

所述酶解前将胶原提取的原料浸没于0.5～1M醋酸中浸泡10～72h。

所述盐析采用质量分数2％～30％的NaCl水溶液。

所述复溶采用0.5～10M醋酸为溶剂。

所述透析的截留分子量为8000～20000Da。

所述球磨温度为-70℃～-20℃，时间为24～72h。

上述制备方法制备的生物活性纳米医用胶原在制备用于抑制神经胶质细胞活化的药物中的应用。

上述制备方法制备的生物活性纳米医用胶原在制备用于海马神经元缺失性疾病治疗的药物以及增强皮肤细胞、受损组织细胞、神经细胞代谢的药物中的应用。

本发明的有益效果体现在：

本发明中的制备方法简单易行，成本低，工艺流程可控性强。本发明制备的纳米胶原纯度高、活性得到有效保留，且杂质少、生产效率高。本发明制备的纳米胶原在医药等领域具有广泛的应用价值。

附图说明

图1为纳米胶原制备流程图。

图2为胶原显微视图。

图3为MTT法检测细胞生物活性的结果。