[发明专利]原儿茶酸调控的开关系统及其调控方法和应用

权利要求书

1.一种原儿茶酸调控的开关系统，其特征在于，所述系统包括：

a）：原儿茶酸调控的“开”系统；

和/或，

b）：原儿茶酸调控的“关”系统；

其中，

所述原儿茶酸调控的“开”系统是由重组转录抑制子，原儿茶酸诱导型强启动子和待转录序列三部分组成；所述重组转录抑制子为重组转录抑制子KRAB-PcaV，是由转录抑制蛋白KRAB融合至DNA结合域上获得；所述DNA结合域是来源于原儿茶酸操纵子系统的阻遏蛋白PcaV；所述的原儿茶酸诱导型强启动子根据强启动子的种类和操纵子O_pcaV 的不同拷贝数可组成不同类型的融合型强启动子，如SEQ ID NO.1~10所述的核苷酸序列；

所述原儿茶酸调控的“关”系统是由重组转录激活子，原儿茶酸诱导型弱启动子和待转录序列三部分组成；所述重组转录激活子是由PcaV蛋白融合到转录激活蛋白上获得；所述转录激活蛋白包括单纯疱疹病毒颗粒蛋白VP16转录激活结构域、NF-ΚB p65亚基转录激活结构域、热休克转录因子HSF1转录激活域；所述的诱导型弱启动子根据操纵子O_pcaV的不同拷贝数可组成不同类型的融合启动子，如 SEQ ID NO.13~17所示的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的开关系统，其特征在于，所述的重组转录抑制子由不同种类的强启动子启动表达，包括P_SV40，其核苷酸序列Genbank登录号：KY053832；P_hCMV ，其核苷酸序列Genbank登录号：KY199427；P_hEF1α，其核苷酸序列Genbank登录号：AY043301；和P_CAG ，其核苷酸序列Genbank登录号：HQ456319。

3.如权利要求1所述的开关系统，其特征在于， 所述的重组转录激活子包括单纯疱疹病毒颗粒蛋白VP16转录激活结构域，氨基酸序列Genbank登录号：AEX37895；NF-ΚB p65亚基转录激活结构域，氨基酸序列Genbank登录号：ABK40095；热休克转录因子HSF1转录激活域，氨基酸序列Genbank登录号：BAM10893。

4.一种原儿茶酸诱导基因表达的调控方法，其特征在于，所述方法是由权利要求1中所述的原儿茶酸调控的“开”系统进行调控；其中，当原儿茶酸诱导物不存在时，所述重组转录抑制子可结合至所述原儿茶酸诱导型强启动子上，进而阻遏下游待转录序列的表达；而当原儿茶酸诱导物存在时，原儿茶酸阻断其结合，使所述重组转录抑制子从所述原儿茶酸诱导型强启动子上解离下来，启动下游待转录序列的表达。

5.一种原儿茶酸关闭基因表达的调控方法，其特征在于，所述方法是由权利要求1中所述的原儿茶酸调控的“关”系统进行调控；当原儿茶酸诱导物不存在时，所述的重组转录激活子可结合至所述的原儿茶酸诱导型弱启动子上，进而激活下游待转录序列的表达；而当原儿茶酸诱导物存在时，原儿茶酸解除其结合，使重组转录激活子从诱导型弱启动子上解离下来，关闭下游待转录序列的表达。

6.一种真核表达载体，其特征在于，其包括如权利要求1中所述的原儿茶酸调控的“开”系统和/或 原儿茶酸调控的“关”系统。

7.一种工程化细胞，其特征在于，其包括如权利要求1中所述的原儿茶酸调控的“开”系统和/或 原儿茶酸调控的“关”系统。

8.一种微胶囊，其特征在于，其包括如权利要求1中所述的原儿茶酸调控的“开” 系统和/或 原儿茶酸调控的“关”系统。

9.如权利要求1所述的原儿茶酸调控的开关系统在生物计算机上的应用。