[发明专利]一种从铁皮石斛菌根菌中制备镰刀菌的方法

说明书

本发明公开了一种从铁皮石斛菌根菌中制备镰刀菌的方法，选用生长于海拔不高于1000米的健康铁皮石斛根原料先培养菌根菌，然后对菌根菌进行分离和纯化后制得镰刀菌；菌根菌培养时，将铁皮石斛根用自来水冲洗干净，晾干后，用70%酒精棉球消毒3次，用无菌的剪刀剪成3‑5mm的小段，均匀放在马铃薯200g、蔗糖20g、水1000mL混合的液体PDA培养基上，放在25‑28℃的人工气候箱内培养5‑7天；形成菌根菌后将真菌菌落和细菌菌落分离进行分离，在真菌菌落边缘挑取幼嫩、无杂菌的菌落移至内装300 mL PDA培养基液体的500 mL三角烧瓶内继续震荡培养7天，即可制得镰刀菌。本发明方法制备简便，成本低。

技术领域

本发明属于植物生长促进材料制备技术领域，尤其与一种从铁皮石斛菌根菌中制备镰刀菌的方法有关。

背景技术

铁皮石斛是一种兰科草本植物，茎直立，圆柱形，不分枝，具多节，节间长1-3-1.7厘米。铁皮石斛也是一种为菌根植物，在自然条件下，所有石斛属植物均与内生真菌共生形成菌根结构，菌根真菌在植物整个生活史中扮演着重要的角色。在铁皮石斛菌根真菌中以镰刀菌对铁皮石斛生长促进作用最为明显。为使镰刀菌的使用批量产业化，开发从铁皮石斛菌根菌中制备镰刀菌的方法已成为一个急迫的技术需求。

发明内容

本发明的目的旨在解决如何从铁皮石斛菌根菌中制备镰刀菌的技术问题，提供一种从铁皮石斛菌根菌中制备镰刀菌的方法。

为此，本发明采用以下技术方案：一种从铁皮石斛菌根菌中制备镰刀菌的方法，其特点是，所述方法是选用生长于海拔不高于1000米的健康铁皮石斛根原料先培养菌根菌，然后对菌根菌进行分离和纯化后制得镰刀菌；菌根菌培养时，将合格的铁皮石斛根用自来水冲洗干净，晾干后，用70%酒精棉球消毒3次，用无菌的剪刀将铁皮石斛根剪成3-5mm的小段，均匀放在PDA培养基上，放在25-28℃的人工气候箱内培养5-7天，PDA培养基采用液体培养基培养，液体培养基为马铃薯200g、蔗糖20g、水1000mL的混合物；形成菌根菌后将真菌菌落和细菌菌落分离进行分离，在分离得到的真菌菌落中挑取菌落边缘的幼嫩、无杂菌的菌落移至另一个培养容器内继续培养，培养容器采用500 mL的三角烧瓶，三角烧瓶里装300mL 的PDA培养基液体，把菌种放在三角烧瓶里，在恒温振荡器里震荡培养7天，即可制得适合促进铁皮石斛苗生长的镰刀菌。

本发明可以达到以下有益效果：通过使用液体PDA培养基先培养菌根菌，然后从菌根菌中分离纯化出适合促进铁皮石斛苗生长的镰刀菌，制取简单方便，培养基成本低，利于批量产业化。

具体实施方式

本发明方法选用生长于海拔不高于1000米的健康铁皮石斛根原料先培养菌根菌，然后对菌根菌进行分离和纯化后制得镰刀菌；菌根菌培养时，将合格的铁皮石斛根用自来水冲洗干净，晾干后，用70%酒精棉球消毒3次，用无菌的剪刀将铁皮石斛根剪成3-5mm的小段，均匀放在PDA培养基上，放在25-28℃的人工气候箱内培养5-7天，PDA培养基采用液体培养基培养，液体培养基为马铃薯200g、蔗糖20g、水1000mL的混合物；形成菌根菌后将真菌菌落和细菌菌落分离进行分离，在分离得到的真菌菌落中挑取菌落边缘的幼嫩、无杂菌的菌落移至另一个培养容器内继续培养，培养容器采用500 mL的三角烧瓶，三角烧瓶里装300mL 的PDA培养基液体，把菌种放在三角烧瓶里，在恒温振荡器里震荡培养7天，即可制得适合促进铁皮石斛苗生长的镰刀菌。