[发明专利]一种测定酸性糖可溶性盐重均分子量和含量的方法

说明书

本发明属于天然药物化学及其质量控制领域，涉及一种测定酸性糖可溶性盐重均分子量和含量的方法，包括使用酸性糖可溶性盐中的金属离子含量对分子筛色谱结合多角度激光散射检测器SEC‑MALS测定酸性糖的重均分子量和含量结果进行校正。利用本发明方法可更快速、准确地测定酸性糖可溶性盐的重均分子量和含量。

技术领域

本发明属于天然药物化学以及其质量控制领域，具体地涉及酸性糖类物质的重均分子量和含量的测定和质量控制方法。

背景技术

多糖是天然来源的主要的生物活性化合物，可来自植物、真菌等。多糖的分子量大，结构复杂，因此，多糖的分子量的准确测定是一个挑战。

目前，中国药典中，高效液相凝胶渗透色谱法(Gel Permeation Chromatography,GPC)是测定分子量的常规做法，其是按照排阻色谱的原理，不同分子量的多糖按照其大小顺序先后流出色谱柱，通过一系列不同分子量标准多糖与保留时间的相关性测得的校正曲线并计算相应的待测多糖的相对分子量。但该常规方法必须要有相应的多糖标准品而有一定的局限性。

此外，多糖和寡糖含量测定的常用方法为硫酸咔唑法，该方法首先以浓度及单糖标准品的显色做标准曲线，再在标准曲线上读出待测样品的含量。但是酸性糖的单糖甘露糖醛酸并没有标准品出售，若以葡萄糖醛酸为标准品，其与酸性糖的结构及显色效率存在差异，不能对酸性糖进行精确定量。

近年来出现的尺寸排阻色谱联用多角度激光散射(Size-ExclusionChromatography/Multi-Angle Laser Light Scattering，SEC-MALS)测定样品绝对重均分子量、分子量分布和含量在业界引起了广泛的关注。本领域中有研究人员将MALS和尺寸排阻色谱(SEC)联用，不必依赖泵的流速、校正曲线及其他错误的假设，即可直接求得分子量及分子量分布等数据。MALS利用色谱柱分离出的样品在不同角度的光散射量，由示差折光(RI)检测器得到洗脱液浓度及dn/dc值计算得到质量，综合两者即可计算出各个切片的分子量。该方法不需标准品校准，克服了样品与标准品的化学组成、分子结构及大小不同带来的相对分子量测定的误差。已有研究者采用这一方法测定了壳聚糖、透明质酸的平均分子量(Monica Fee,Neil Errington,Kornelia Jumel,et al.Correlation of SEC/MALLSwith ultracentrifμge and viscometric data for chitosans.Eur Biophys J(2003)32:457～464；Sanya Hokputsa,Kornelia Jumel,Catherine Alexander,etal.Comparison of molecular mass determination of Hyaluronic acid using SEC/MALLS and sedimentation equilibrium.Eur Biophys J(2003)32:450～456)，还有研究者采用该方法对天然中性多糖进行定量，(Kit-Leong Cheong,Ding tao Wu,Jing Zhao,etal.A rapid and accurate method for the quantitative estimation of naturalpolysaccharides and their fractions using high performance size exclusionchromatography coupled with multi-angle laser light scattering and refractiveindex detector.Journal of Chromatography A(2015)1400:98～106)。目前欧洲药典已经采用此方法作为羟乙基淀粉重均分子量及分子量分布的测定方法(Europeanpharmacopoeia 8.0,p3307-3308,starches hydroxyethyl)。

综上，SEC-MALS可以测定中性多糖重均分子量及含量。

发明内容