[发明专利]一种同时检测石蒜属植物中三种生物碱含量的方法

说明书

本发明公开一种同时检测石蒜属植物中三种生物碱含量的方法，能够对石蒜属植物中的生物碱类物质——加兰他敏、立可拉敏和石蒜碱进行快速提取并定性定量分析。本方法以液质联用技术为基础，进行梯度洗脱，以液相色谱串联二级质谱，在正离子扫描下以MRM模式进行分析，能快速提取并准确定性定量分析石蒜属植物中的上述三种生物碱类物质，大幅缩短分析时间，提高分析准确度，可在6.0min以内的程序时间内得到检测结果，三种生物碱的保留时间均在3min以内，加标回收率为97.2‑100.2％，相对标准偏差(RSD)为0.8‑4.3％，大大提高了分析速度和准确性；从而为研究石蒜属植物中三种生物碱的积累规律和合成代谢调控提供了有效且准确的分析方法。

技术领域

本发明属于生物碱类物质检测技术领域，具体涉及一种同时检测石蒜属植物中三种生物碱含量的方法。

背景技术

石蒜属(Lycoris spp.)是石蒜科(Amaryllidaceae)球根草本植物，其很多种是中国特有的观赏和药用花卉，富含多种石蒜属植物特有的生物碱成分。迄今为止，从石蒜属植物中分离出超过500种结构各异的生物碱类化合物，植物化学研究表明，这类化合物具有多种药理学功能，药用价值极高。其中，加兰他敏和力可拉敏可用于治疗阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease，老年痴呆症早期症状)，石蒜碱在抗菌、抗疟疾、治疗肿瘤、抗病毒和保护心血管等方面有重要价值。至今，野生的石蒜资源仍然是药用生物碱最重要的来源，因此，对石蒜中加兰他敏、力可拉敏和石蒜碱的含量进行准确定性和定量分析是育种和生物碱类物质合成代谢研究的重要内容之一。

目前，对石蒜中生物碱含量进行分析的方法主要有薄层色谱分离技术(thinlayer chromatography，TLC)、高效液相色谱检测技术(high-performance liquidchromatography)、气相色谱-质谱联用分析技术(Gas Chromatography-MassSpectrometry)和高效液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用分析技术(HPLC-electrosprayionization-mass spectrometry,HPLC-ESI-MS)。

李明凯(石蒜生物碱分析方法的建立及其生物合成的研究，安徽农业大学，2012：1-69)利用薄层色谱分离技术，实现了生物碱类物质的初步分离，并且发现双向薄层色谱比单向色谱更适合多种不同生物碱类物质的分离，该方法主要通过与已知的生物碱标样(加兰他敏、力可拉敏、石蒜碱)的迁移率进行对比，实现对样品中生物碱种类的初步定性，但不能用于准确的结构和定量分析。

Quan等(Quan et al.,Photosynthetic characteristics of Lycoris aureaand monthly dynamics of alkaloid contents in its bulbs，African Journal ofBiotechnology，11(15)：3686-3691，2012)利用高效液相色谱检测技术，通过样品与已知的生物碱标准品在同样条件下的保留时间和峰面积的对比，进行了石蒜属忽地笑中加兰他敏和石蒜碱的定量研究，其单次提取石蒜鳞茎材料需要鲜样20g(含水量90％左右)，折合石蒜鳞茎干样2g，需要消耗甲醇110ml，盐酸10ml，氯仿15ml，对植物样本和试剂消耗极大，同时，其仅采用HPLC的方法，根据物质的保留时间进行含量检测，无法对待测物质进行准确定性，因此物质定量结果不可靠，不能进行结构、定性和精确定量分析。