[发明专利]一种环保型液基细胞保存液及其制备方法以及应用

说明书

技术领域：

本发明涉及生物技术领域，具体的涉及一种环保型液基细胞保存液及其应用。

背景技术：

膜式超薄液基细胞学检测(thinprep liquid basedcy-tology test，TCT)技术近年来已广泛应用于临床细胞病理学诊断。研究显示该技术在细胞学病理检查中有很大的诊断价值。然而由于临床细胞样本多样化而对细胞保存液有不同的要求，因而液基细胞在临床不同细胞学样本诊断中的应用受到了一定限制。为适应临床不同细胞学检测样本的液基细胞，研究出性能优异的液基细胞保存液是关键。

专利200910034575.4公开了一种液基细胞保存液，它基本由以下成分组成，按体积比醇类10％-30％，以双蒸水补足100％；以质量/体积百分浓度计：含磷酸盐0.1％-3.0％、苯酚0.1％-2.0％、N-甲基-N-环己基-2-氨基-3，5-二溴苯甲胺盐酸盐0.1％-2.0％。本发明研制的液基细胞保存液，进行自动制片机制片制得的涂片背景清晰透明、细胞单层均匀分布，便于病理科医生的读片。但是其安全性较低。

专利201210421365.2公开了一种细胞保存液，它包含如下成分：NaCl 120～137mM、KCl 2.2～2.8mM、柠檬酸钠3～9mM、葡萄糖15～20mM、CaCl 20.6～1.2mM、1.5～3.5％(w/v)白蛋白、0.3～0.8％(w/v)氨基酸和0.015～0.035％(w/v)维生素。本发明还公开了一种细胞保存液的制备方法以及细胞的保存方法。本发明细胞保存液安全，能长时间维持细胞的活率，但是本发明公开了细胞保存液热稳定性较差。

发明内容：

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种环保型液基细胞保存液，该保存液能有效的保护细胞的完整性与活性，防止细胞溶解与聚集粘连，并且无外源伤害，且热稳定性好，安全性高。

本发明的另一个目的是提供该细胞保存液的制备方法以及其应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种环保型液基细胞保存液，以质量百分比计，由以下组分组成：

优选地，一种环保型液基细胞保存液，以质量百分比计，由以下组分组成：

优选地，该细胞保存液的pH值为7.0-7.4。

优选地，一种环保型液基细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：

(1)将琥珀酸酐、戊二酸酐和N,N-二甲基乙酰胺混合搅拌均匀，然后缓慢加入多聚赖氨酸，混合均匀后，置于反应器中，缓慢升温至65℃，搅拌反应12-40h；反应结束后，冷却至室温，并向反应器中边搅拌边加入无水乙醇，析出的沉淀过滤，并用去离子水洗涤，干燥，得到改性多聚赖氨酸；

(2)按配比称取改性多聚赖氨酸、氯化钠、苯酚、甘油和水；

(3)将称取的水置于不锈钢桶中，并开启增力电动搅拌器，设置转速为200-700r/min，然后依次向不锈钢桶中加入氯化钠，搅拌至固体溶解，然后加入苯酚，搅拌混合均匀后再加入多聚赖氨酸，搅拌1min，最后向不锈钢桶中加入甘油，加入完毕后搅拌10min，制得细胞保存液。

优选地，步骤(3)中，所述搅拌转速为300r/min。

优选地，步骤(1)中，所述N,N-二甲基乙酰胺、多聚赖氨酸的用量比为50mL：(0.8-1.3)g。

优选地，步骤(1)中，所述戊二酸酐、琥珀酸酐和多聚赖氨酸的摩尔比为11:23:1。

优选地，将收集到的人体细胞投入到细胞保存液中即得样本，并将其置于2-8℃下保存。

人体变态反应细胞包括肥大细胞、树突细胞、嗜碱性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等，这些细胞参与人类变态反应，导致过敏性哮喘、鼻炎、荨麻疹等变态反应疾病。本发明提供的细胞保存液利用细胞保存技术，可有效保护细胞的完整性和活性；本发明制得的细胞保存液储存在干燥、清洁的环境内，有效期为2年，封装于试剂瓶内，开瓶后有效期为两年。

多聚赖氨酸的分子量对细胞保存液的性能有很大的影响，其分子量太大的话，会使得细胞保存液的黏附力强，但是其分子量太小的话，多聚赖氨酸的抑菌活性较低；本发明采用的多聚赖氨酸的分子量为3600～4300；而且对于保存不同的细胞所采用的多聚赖氨酸的分子量也不同。

本发明提供的细胞保存液用于保存、运输取自人体的细胞，仅用于体外分析检测目的，不用于治疗性用途。

本发明具有以下有益效果：