[发明专利]一种检测猪沙门菌抗体的试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测猪沙门菌抗体的试剂盒，该试剂盒包括抗原蛋白，所述抗原蛋白为fljB蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，本发明的fljB蛋白抗原性良好，特异性强、纯度和产量高；试剂盒中抗原蛋白的包被浓度为20μg/mL，阴阳性血清的稀释倍数为1:200。本发明的试剂盒能够用于临床样本中猪沙门菌fljB抗体的快速检测。本发明试剂盒弥补了目前缺乏单一抗原对沙门菌感染进行诊断的不足，降低了漏检率，精密度也更高，为我国猪群中沙门菌的流行病学调查提供了敏感的检测手段，可用于猪沙门菌感染的早期诊断。

技术领域

本发明涉及一种ELISA检测试剂盒，具体地说是一种检测猪沙门菌抗体试剂盒。

背景技术

沙门菌(Salmonella)是一种广泛存在于自然界中依靠鞭毛运动的革兰氏阴性细菌，不产生芽孢，有的含有荚膜，属于肠杆菌科沙门菌属，在常见的家禽、鸟类、哺乳类的动物肠道中都能发现。沙门菌是引起食源性疾病的最主要的原因之一，可通过家畜的粪便，污染的水，施肥技术等传播，并且它可以生长在许多不同的食物中，这些都使沙门菌成为人类和动物的重要防治对象。现今己发现的沙门菌O抗原超过67种，血清型超过2000个，几乎每年都有新的血清型被发现，这为沙门菌感染的血清学诊断和检测带来很大困难。及时有效的发现并控制沙门菌是最有效的防止其扩散的方法。目前，沙门菌血清学检测方法主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光抗体试验(IFAT)和血清凝集试验(SAT)等，ELISA是当前生产中应用最广泛的血清学检测方法，具有特异、快速、简便、敏感性高等特点，但IFAT和SAT检测方法都存在着特异性差、操作繁琐等不足。目前尚缺乏通过单一抗原对沙门菌感染进行血清学诊断和检测的敏感、特异、快速、简便方法。

目前，玻板凝集试验是检测猪沙门菌感染常用的方法，而这一方法敏感性欠佳，难以检测出抗体滴度低的带菌猪，需要反复使用玻板凝集方法淘汰阳性猪才能达到沙门菌净化的目的，浪费人力资源且总有一定比例的感染猪不能被检出。而带毒猪排毒具有间歇性，使得分离细菌的方法也具有一定的漏检，且检测周期较长。PCR方法则需要昂贵的仪器，不适宜猪场应用。

fljB是沙门菌的II相鞭毛蛋白，可构成鞭毛抗原(H抗原)，该鞭毛蛋白对该菌在机体内的侵袭及扩散起到了关键作用，侵袭宿主后会导致机体产生强烈的免疫应答。且70％的沙门菌亚种编码控制II相鞭毛蛋白的fljB基因，且II相鞭毛素fljB仅存在于沙门菌中。鞭毛蛋白可以激活机体的天然免疫系统，第一时间识别病原体并对入侵机体的病原微生物做出免疫应答反应，上调抗原递呈细胞的表面共刺激分子后，可以激活T细胞，从而诱导获得性免疫反应。目前没有利用fljB抗原对沙门菌进行检测的报道。

发明内容

针对上述不足，本发明提供一种用于检测猪沙门菌抗体的试剂盒，其操作简单，灵敏度高，特异性强，稳定性和重复性好，避免漏检，具有良好的应用前景。

本发明提供的一种检测猪沙门菌抗体的试剂盒，包括抗原蛋白或抗原蛋白溶液，所述抗原蛋白的氨基酸序列为如下a或b或c：

a.SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；

b.在其N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；

c.SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由SEQ ID NO.3衍生的蛋白质。

编码SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明的fljB重组蛋白(SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列)是通过以下方法制备而成：

猪沙门菌fljB重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示的特异性引物对猪沙门菌基因组DNA进行PCR扩增，扩增产物纯化后，连接T载体，连接产物转入感受态中，获得含有阳性表达质粒的重组菌；