[发明专利]一种同时测定11种类黄酮的高效液相色谱检测方法及检测水果中的类黄酮含量的方法

说明书

本发明提供一种同时测定11种类黄酮的高效液相色谱检测方法，属于类黄酮检测领域，所述11种类黄酮为飞燕草素葡萄糖苷、飞燕草色素芸香糖苷、芍药色素葡萄糖苷、矢车菊素芸香糖苷、矢车菊素葡萄糖苷、芦丁、山柰酚、槲皮素、杨梅黄酮、异鼠李素以及芹菜素。本发明通过对高效液相色谱色谱条件的精确限定，在不同的保留时间检测到不同种类的类黄酮物质，色谱峰的最小分离度为1.54，实现了11种类黄酮的同时测定。实施例的数据表明，本发明实现了对11种类黄酮的同时测定，且操作简单快捷，同时峰面积和保留时间的标准偏差较小，具有较高的准确性。

技术领域

本发明涉及类黄酮含量检测技术领域，特别涉及一种同时测定11种类黄酮的高效液相色谱检测方法及检测水果中的类黄酮含量的方法。

背景技术

类黄酮又称生物类黄酮，是人类饮食中含量最丰富的一类多酚化合物，广泛存于水果、蔬菜等作物中，目前已经确认有四千多种不同的类黄酮，其中水果中含量较多的类黄酮是黄酮、黄酮醇类及花色苷类化合物。类黄酮具有较强的抗氧化、清除自由基能力，并有调节心血管系统、内分泌系统、抗癌防癌、抗衰老等重要生物活性。

类黄酮的分析方法有紫外分光光度法、硝酸铝比色法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、色谱-质谱联用法等。紫外分光光度法和硝酸铝比色法多用于测定类黄酮的重含量，毛细管电泳法和色谱-质谱联用法多用于鉴定组分类型，实际用于类黄酮组分含量检测的主要是高效液相色谱法。高效液相色谱法操作简单、准确度高、重现性好，但由于花色苷类、黄酮醇类和黄酮类物质各组分的检测条件和方法差别较大，常需分批多次检测，工作繁琐、量大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时测定11种类黄酮的高效液相色谱检测方法。本发明提供的检测方法具有测定范围广、操作简单快捷的特点。

本发明提供了一种同时测定11种类黄酮的高效液相色谱检测方法，所述11种类黄酮为飞燕草素葡萄糖苷、飞燕草色素芸香糖苷、芍药色素葡萄糖苷、矢车菊素芸香糖苷、矢车菊素葡萄糖苷、芦丁、山柰酚、槲皮素、杨梅黄酮、异鼠李素以及芹菜素，包括以下步骤：

(1)配制包含所述11种类黄酮标准样品的待测溶液；

(2)将所述步骤(1)得到的待测溶液进行高效液相色谱分析，得到待测样品的色谱图，所述高效液相色谱分析的色谱条件为：

分析柱：C-18柱；

流动相：水相A:0.3wt％磷酸水溶液；有机相B：乙腈；

流速：1mL/min；

洗脱方式：梯度洗脱，0min，A:B＝95:5，20min，A:B＝85:15，30min，A:B＝75:25，40min，A:B＝50:50，48min，A:B＝95:5；

检测波长：510nm、360nm；

检测温度：40℃；

进样体积：10μL；

检测时间：50min；

检测器：G1314F VWD检测器；

(3)根据所述待测样品的色谱图与预定的标准谱图进行对比，得到待测样品中类黄酮的种类。

优选地，所述检测时间为(0,20)min时，检测波长为510nm，所述检测时间为[20,50]min时，检测波长为360nm。

优选地，所述待测溶液进行高效液相色谱分析前还包括用0.22μm的有机滤膜对待测溶液进行过滤，得到进样溶液。

优选地，所述混合标准溶液中11种类黄酮的浓度独立地为2.5～500.0μg/mL。