[发明专利]一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法

权利要求书

1.一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）沙门氏菌检测抗体修饰磁纳米粒子

将沙门氏菌检测抗体修饰生物素分子，磁纳米粒子修饰链霉亲和素，通过生物素和链霉亲和素的亲和识别与结合将沙门氏菌检测抗体修饰到磁纳米粒子上；

（2）沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备

将沙门氏菌捕获抗体包被酶标板，加入沙门氏菌被酶标板上的捕获抗体捕获，再加入检测抗体修饰的磁纳米粒子形成捕获抗体—沙门氏菌—检测抗体—磁纳米粒子的复合物，通过磁共振成像进行检测。

2. 根据权利要求1所述的一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法，其特征在于沙门氏菌检测抗体修饰磁纳米粒子的步骤为：

（1）沙门氏菌检测抗体修饰生物素

将沙门氏菌检测抗体用pH8.6 0.05M的醋酸盐缓冲液透析3次，然后再用pH8.6 0.05M的醋酸盐缓冲液将抗体稀释到1mg/mL，取1mL抗体在其中加入150μL浓度为1mg/mL的生物素-N-琥珀酰亚胺基酯，在37℃条件下振荡反应3h，然后加入20μL 1M的NH₄Cl溶液，置于室温条件下放置20min使得反应终止，再将抗体用pH7.4 0.01M的PBS缓冲液透析3次，以除去多余的生物素分子；

（2）磁纳米粒子修饰链霉亲和素

将1mg/mL的15nm羧基基团修饰的磁纳米粒子用pH6.5的MES缓冲液稀释20倍，取5mL磁纳米粒子溶液，加入35mg N-羟基琥珀酰亚胺和55mg碳二亚胺，在缓慢振荡的条件下进行羧基活化，活化1~4h后，外加磁场吸附磁纳米粒子，并去除上清用等体积的pH7.4 0.01M的PBS缓冲液将磁纳米粒子进行重悬，然后加入1mg链霉亲和素溶液，在室温条件下继续振荡反应2~4h，最后外加磁场吸附磁纳米粒子，除去上清再用等体积的PBS磁纳米粒子进行重悬；

（3）沙门氏菌检测抗体修饰的磁纳米粒子

将步骤（1）和步骤（2）得到的溶液充分混合，在37℃条件下反应1h，使得生物素和亲和素充分结合，然后外加磁场吸附磁纳米粒子去除上清，再用抗体稀释液将磁纳米粒子进行重悬，从而得到抗体修饰的磁纳米粒子。

3. 根据权利要求1所述的一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法，其特征在于沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备流程为：

（1）沙门氏菌捕获抗体包被酶标板

用包被缓冲液将沙门氏菌捕获抗体稀释成1μg/mL，加入酶标板中每孔加100μL，在37℃的烘箱中孵育2h，然后用PBST洗液进行3次洗涤拍干，得到沙门氏菌捕获抗体包被的酶标板；

（2）沙门氏菌的检测以及双抗体夹心体系的形成

将浓度为0CFU/mL、50CFU/mL、100CFU/mL、200CFU/mL、500CFU/mL、1000CFU/mL的沙门氏菌加入到酶标板中，每孔100μL，将其置于37℃烘箱中反应1h，然后取出用PBST洗液洗涤3次，再向每孔中加入100μL的检测抗体修饰的磁纳米粒子，置于37℃烘箱反应30min后，将酶标板用PBST洗液洗涤3次，再向每孔中加入100μL超纯水，将酶标板进行充分振荡，测定每孔的T2弛豫时间，再进行磁共振成像扫描。

4.根据权利要求2所述的一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法，其特征在于所述的步骤（2）中磁纳米粒子的羧基活化时间为2h。

5.根据权利要求2所述的一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法，其特征在于所述的步骤（2）中链霉亲和素与磁纳米粒子的反应时间为3h。

6. 根据权利要求2所述的一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法，其特征在于所述的步骤（3）中抗体稀释液为0.01M pH7.2的PBS缓冲液。

7. 根据权利要求3所述的一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法，其特征在于所述的包被缓冲液为0.01M pH9.6的碳酸盐缓冲液。