[发明专利]具有核定位能力的透皮短肽及其应用

说明书

本发明涉及一种具有核定位能力的透皮短肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；本发明还提供了一种具有核定位能力的融合蛋白，包括大分子蛋白，大分子蛋白的一端连接上述透皮短肽。本发明还公开了上述透皮短肽在制备治疗皮肤病的药物或透皮制剂中的应用。本发明进一步提供了一种治疗皮肤病的药物，包括上述透皮短肽以及药学上可接受的辅料。本发明的透皮短肽可自主进入细胞后定位于细胞核且具有透皮能力，能透过皮肤角质层，进入真皮层中的细胞中。该短肽人工合成方便、能够通过透皮给药，具有携带治疗皮肤疾病药物进行透皮给药治疗的潜力。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种具有核定位能力的透皮短肽及其应用。

背景技术

皮肤是人体最大的器官，它覆盖于全身的表面，约占体重的16％，总面积达1.2～2平方米。皮肤由表皮层、真皮层和皮下组织组成，含有丰富的血管、神经以及多种皮肤附属器，包括毛发、毛囊、汗腺、皮脂腺等。它是机体的第一道防线，防止组织和内脏器官受到外来的物理、化学、生物刺激因子对机体的侵袭。除此之外，皮肤还具有免疫、感受刺激、调节体温、吸收分泌和排泄等作用。角质层是表皮最外层的部分，主要由10-20层扁平、没有细胞核的死亡细胞组成。当这些细胞脱落时，其下方位于基底层的细胞会被推上来，形成新的角质层。角质层的功能是对皮肤进行物理性、机械性、化学性以及生物性的保护，能够阻挡绝大多数大分子物质的进入，使其免受有害物质的损伤，保持其功能的完整性。但是角质层这一屏障也阻止了表皮和真皮组织对通过表皮补给的外源营养物质和药物的吸收。

透皮促渗剂是一类是指可以加快外用药物穿透皮肤的化合物，如吡咯酮类、氮酮、萜类、氨基酸脂类等化合物。然而现有的透皮促渗化合物持续时间短，易被代谢掉，且透皮效果不理想，高浓度时具有皮肤毒性，尤其对于蛋白质等生物大分子的透皮几乎没有作用。

正是由于大分子蛋白质和多肽类药物均系亲水性大分子，几乎不能透过皮肤角质层的亲脂性屏障。即使在透皮促渗剂的帮助下，分子量大于500Da的蛋白质分子也难以透过角质层。因此，长期以来，具有生物活性的大分子蛋白质的透皮给药一直没有解决。如何使得具有重要价值的生物大分子能够通过表皮途径给药成为研究的难点与热点。采用物理方法介导蛋白质透皮研究广泛，包括超声、电击、微针等方法，但是由于上述方法对设备具有依赖性，难以得到大规模应用。

近年来采用短肽介导的蛋白质透皮引起了广泛的关注。寻找到新的能介导大分子透皮的短肽后，有望通过将功能性蛋白质、多肽及化合物与透皮短肽相连后，通过透皮给药的方式治疗相关疾病。因此，提供一种具有核定位能力的透皮短肽具有重要的现实意义。

细胞核(nucleus)是真核细胞内最大、最重要的细胞器，是细胞遗传与代谢的调控中心，是真核细胞区别于原核细胞最显著的标志之一。细胞膜及细胞核膜均是选择性通透的膜，这一方面对于细胞及细胞核是一种保护，但也组织了功能性细胞及细胞核保护分子的进入。因而筛选能介导关键分子进入细胞膜及核膜并定位于细胞核的短肽对于携带重要分子保护细胞核具有重要意义。但目前未出现关于同时具有核定位及透皮能力的短肽的报道。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种具有核定位能力的透皮短肽及其应用，本发明的透皮短肽可自主进入细胞并定位于细胞核，且能透过皮肤角质层，进入真皮层中的细胞中；该短肽人工合成方便、能够通过透皮给药。

本发明提供了一种具有核定位能力的透皮短肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，透皮短肽可自主进入真核细胞。

进一步地，透皮短肽还连接有荧光素。

进一步地，荧光素为异硫氰酸荧光素(FITC)、罗丹明或羧基荧光素(FAM)。

进一步地，真核细胞为HaCaT细胞、WS1细胞、TE-1细胞、Eca-109细胞、Hela细胞或原代皮肤细胞。

具有核定位能力的透皮短肽的等电点为10.92，分子量为2465Da。